[發明專利]一種用重組基因轉染的異體皮膚

有效

• 申請號: 00103528.2
• 申請日: 2000-03-27
• 公開（公告）號: CN1315207A
• 公開（公告）日: 2001-10-03
• 發明（設計）人: 吳軍;魏泓;易紹萱;羅高興;賀偉峰;周立新;陳烯煒;張寧
• 申請（專利權）人: 重慶西南醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61F2/10;C12N15/09;C12N15/12
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 嚴舫

本發明涉及一種用重組基因轉染的異體皮膚，具體地說，本發明涉及一種用CTLA4Ig重組基因轉染的異體皮組織，用于覆蓋燒傷等創面，從而促進創面愈合，減少疤痕形成。

對燒傷創面異體(種)皮膚移植的研究是現代燒傷治療的迫切需要：燒傷是一類發生率及致殘率均較高的特殊類型創傷，其根本問題就是創面問題，如果燒傷創面得不到及時有效的覆蓋、封閉，必將引起患者機體內環境的紊亂、感染及多臟器功能障礙的發生；此外，還將出現創面的非生理性愈合，使疤痕形成增加，殘疾程度加劇。因此，對燒傷創面的研究一直是燒傷界研究的熱點及難點。

異體皮及異種豬皮早已應用于燒傷創面治療中，但由于移植后的免疫排斥反應，使它們的應用及療效受到了極大地限制。深度燒傷創面需經皮膚移植才能愈合，而大面積、特大面積燒傷患者自體皮源嚴重不足，需經非自體(異體和異種)皮覆蓋創面，但非自體皮將在短時間內(2-4周)被排斥，即使是試圖通過近年發展起來的微粒皮技術封閉創面，也需應用異體(種)皮覆蓋于微粒皮上，以為自體微粒皮提供合適的生長增生條件，但我們在臨床上發現：在微粒皮還沒有完全生長覆蓋創面前，異體(種)皮就由于免疫排斥等而壞死脫落，使微粒皮失去繼續生長擴展的環境，從而使手術達不到理想的效果。另外，切取自體皮同樣也是一種創傷，很多患者不愿切取自體皮，而希望有其它皮膚代替。所以如何延長燒傷創面異體(種)移植皮膚成活甚至永久成活的研究是現代燒傷治療的迫切需要。

影響器官移植成功的關鍵是免疫排斥反應，迄今，防治移植排斥反應的主要對策是通過過各種途徑抑制宿主的免疫功能。也正是由于免疫抑制性藥物如環皰霉素、FK506、OKT3等的問世，包括皮膚移植在內的器官移植取得了長足的進展。但是這些藥物都有一個共同的特點，其抑制機體免疫功能的作用是非特異的、全面持久的，從而易引發感染、產生腫瘤等嚴重后果。所以近年來醫學界提出了特異性免疫耐受理論：即機體僅對移植抗原產生耐受，而保留機體的其它免疫功能。目前誘導宿主特異性免疫耐受主要有以下四種方法：(1)胸腺中注射供體細胞或MHC抗原；(2)封閉CD4和CD8T淋巴細胞；(3)改造供體的MHC抗原；(4)阻斷T細胞輔助刺激信號系統。其中，阻斷T細胞輔助刺激信號系統被認為是最有前途的方法。從免疫耐受理論出發，并結合臨床實際，近來又有人提出了局部免疫耐受(1ocal?immunetolerance)理論，即通過各種方法在移植局部環境中抑制宿主的免疫功能，引發局部免疫耐受。這樣，既達到延長移植物存活時間，又使對宿主自身免疫功能的影響降到最低程度。這對燒傷治療尤為關鍵，因燒傷病人，特別是嚴重燒傷患者，免疫功能紊亂，免疫力低下，而致極易并發感染。如此時再抑制患者的免疫功能，則更易引發致命性感染等嚴重后果。所以我們綜合阻斷T細胞輔助信號和局部免疫耐受兩個學術觀點，并結合燒傷創面治療實際特點，通過在燒傷創面誘導移植皮膚局部特異性免疫耐受，而達到延長移植異種皮膚成活甚至永久成活的目的。

皮膚移植的免疫排斥反應是典型的細胞性排斥反應，活化的T細胞在皮膚移植排斥反應中起著決定性作用。而近年的研究表明，T細胞必須在TCR/MHC識別及輔助刺激信號共同作用下才能完全活化。阻斷輔助刺激信號，將會引起T細胞的無反應，或細胞凋亡(apoptosis)。迄今，已發現多種輔助刺激信號系統，如B7/CD28-CTLA4系統，CD40/CD40L系統，CD95(Fas)/FasL系統等。但迄今的研究認為，在所有的輔助刺激信號系統中，B7/CD28-CTLA4系統的作用最大、最肯定。可溶性CTLA4能競爭性阻斷抗原提呈細胞的B7分子與T細胞上的CD28結合，從而阻斷T細胞的完全活化。研究表明，外源性CTLA4可明顯抑制各種抗原刺激的T細胞的活化。但它并不影響T細胞的細胞毒性等功能，此時的T細胞同樣對入侵的病毒、細菌等具有免疫能力；并且CTLA4只有在應用時才阻斷T細胞的活化，沒有持續及累加效應。這些是目前各種正在應用的免疫抑制劑無法比擬的。研究表明，CTLA4對以T細胞過度活化為主要原因的自身免疫性疾病等有明顯的治療作用；它還能明顯延長心、腎、胰島等移植器官的成活。在現有技術中，沒有它在燒傷創面皮膚移植方面的應用。同時由于CTLA4的制備、提純困難，全身甚至局部應用費用昂貴，且研究發現，只有當機體內的CTLA4一直維持在某一水平，其誘導移植物特異性免疫耐受的能力才最明顯。說明，直接應用CTLA4純品不但難度較大，而且效果有限。

本發明的目的是提供一種用CTLA4Ig重組基因轉染的異體皮膚，用于覆蓋、封閉燒傷創面。