本發明提供一種唾液中煙堿含量的測定方法，至少包括以下步驟：（1）采用微孔濾膜對唾液進行過濾，得濾液；（2）采用高效液相色譜法測定濾液中煙堿的含量，其中所述高效液相色譜法中使用的色譜柱為C18柱，色譜柱的柱溫是36℃~37℃，使用的流動相采用甲醇和磷酸鹽緩沖液，所述甲醇和磷酸鹽緩沖液的體積比是50~70:30~50，所述磷酸鹽緩沖液在使用前加入三乙胺并調節pH到6.2~7。本發明的測定方法煙堿專屬性高、抗干擾性強，準確性高、重復性好、穩定性高，回收率97.21%~98.50%。

技術領域

本發明涉及一種唾液中煙堿含量的測定方法，特別是涉及一種高效液相色譜法測定唾液中煙堿含量的檢測方法。

背景技術

口含煙是一種無煙氣煙草制品，是將磨碎的煙草顆粒經過加工后直接放在口腔中消費的一種煙草制品，使用時將其放置在嘴唇與牙齦之間，煙堿等煙草成分經唾液溶解后通過口腔黏膜吸收。作為口含煙中的關鍵成分，煙草釋放出的煙堿可使消費者植物神經和中樞神經系統感受到刺激興奮作用，因而口含煙也會導致成癮。相比于傳統卷煙，口含煙不發生燃燒和裂解，不產生燃燒產物和裂解產物，因此被認為對人體的危害性更小。近年來，隨著世界反吸煙運動的不斷推進，口含煙作為煙草消費的補充形式日益受到關注。

口含煙直接在人體口腔中消費，其中的煙堿需要轉移到唾液中才能被口腔黏膜吸收。因此，唾液中的煙堿含量直接關系著消費者的使用體驗。唾液中煙堿含量隨時間的變化趨勢對口含煙性能也起著關鍵作用。目前關于唾液中煙堿含量的測定方法還未見報道。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種唾液中煙堿含量的測定方法，用于解決現有技術的不足問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明一方面提供一種唾液中煙堿含量的測定方法，至少包括以下步驟：

(1)采用微孔濾膜對唾液進行過濾，得濾液；

(2)采用高效液相色譜法測定濾液中煙堿的含量，其中所述高效液相色譜法中使用的色譜柱為C18柱，色譜柱的柱溫是36℃～37℃，使用的流動相采用甲醇和磷酸鹽緩沖液，所述甲醇和磷酸鹽緩沖液的體積比是50～70:30～50，所述磷酸鹽緩沖液在使用前加入三乙胺并調節pH到6.2～7。

所述濾液也可以是續濾液。

優選地，所述步驟(1)中的微孔濾膜的孔直徑是小于等于0.22μm。

所述色譜柱可以是Agilent Extend C18(4.6×250mm，5μm)，PN：770450-902，SN：USHR009587。

優選地，所述步驟(2)所述甲醇和磷酸鹽緩沖液的體積比是60:40。

所述磷酸鹽緩沖液調節pH為6.5。

優選地，所述步驟(2)中高效液相色譜法中檢測波長為259nm。

優選地，所述步驟(2)中磷酸鹽緩沖液為Na₂HPO₄緩沖液，所述Na₂HPO₄濃度為0.02-0.03mol/L。

具體測定時，先配制7個濃度梯度的煙堿標準品唾液，按照色譜條件，分別測定峰面積，每個濃度測定2次，取平均值進行線性回歸。然后以相同方法供測試品唾液進行測定，將供測試品唾液色譜峰面積帶入標準曲線的回歸方程中得到供測試品唾液中的煙堿的濃度。

本發明另一方面還提供了上述煙堿含量的測定方法用于測定唾液中煙堿含量的用途。

如上所述，本發明的一種唾液中煙堿含量的測定方法，具有以下有益效果：

本發明的測定方法煙堿專屬性高、抗干擾性強，準確性高、重復性好、穩定性高，回收率97.21％～98.50％。