技術領域

本發明涉及腫瘤相關抗體，更具體的，基因工程抗體領域。

背景技術

磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(Glypican-3，GPC3，又稱DGSX，GTR2-2，MXR7，OCI-5，SDYS，SGB，SGBS或SGBS1)是一種細胞表面蛋白，屬于硫酸乙酰肝素蛋白多糖家族。GPC3基因編碼產生70-kDa左右的前體核心蛋白，該前體蛋白能夠被弗林蛋白酶(furin)剪切產生40-kDa左右能夠分泌進入血液的可溶性氨基端肽，和30-kDa左右含有2個硫酸乙酰肝素(HS)糖鏈的膜結合的羧基端肽。GPC3蛋白通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨依附在細胞膜上。

GPC3高度表達于胎兒肝臟，而不表達于正常成年人的肝組織。但在肝細胞肝癌中恢復表達，與肝癌的發生發展有十分密切的關系，不僅在肝癌發生的早期檢出率較高，而且隨著肝癌的發展，其檢出率也隨之增高。而在肝腺癌，膽管細胞癌，肝轉移癌和12種常見實體瘤和21種非肝癌細胞系中均未檢測出GPC3的表達。此外，GPC3也在例如黑色素瘤，卵巢透明細胞癌、卵黃囊瘤、神經母細胞瘤等腫瘤中表達。考慮到GPC3在肝細胞肝癌，黑色素瘤等腫瘤中的高表達，GPC3被認為是腫瘤免疫治療的一個候選靶標。

利用抗GPC3抗體進行肝癌檢測和利用抗GPC3抗體的抗體依賴的(ADCC)或補體依賴的(CDC)細胞毒性的研究已有報道，例如CN101186650A(中外制藥株式會社)，發明名稱為“抗存在于血液中的GPC3的分泌性N-端肽或C-端肽的抗體”；CN102180969A(中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所)，發明名稱為“抗肝癌活性單克隆抗體及其應用”，其涉及用GPC3氨基端359-580位氨基酸殘基為抗原制備的抗GPC3單克隆抗體；CN101633693A(中國人民解放軍第二軍醫大學)，其涉及針對GPC3的氨基端抗原的單克隆抗體；CN101052878A(株式會社英仙蛋白質科學)，其涉及以使用識別GPC3的N端部位的抗體測定GPC3為特征的監控肝炎重癥化的方法；CN1842540A(中外制藥株式會社)，其涉及一種據稱與傳統抗體相比具有較高ADCC活性和CDC活性的抗GPC3單克隆抗體。

此外，表1總結了另外一些自2003年來報道的針對GPC3的單克隆抗體(mAbs)。其中，一種針對GPC3的治療性mAb最近被報道(Advances?in?LiverCancer?Antibody?Therapies：A?Focus?on?Glypican-3?and?Mesothelin，BioDrugs.2011?October?1；25(5)：275-284.)，其針對GPC3位于C端524-563位氨基酸殘基形成的抗原決定簇。根據該報道單克隆抗體GC33(IgG2a，κ)誘導抗體依賴細胞毒作用(ADCC)并表現出抑制小鼠皮下移植HepG2和HuH-7異種移植物的腫瘤生長，其抗腫瘤作用主要源于自然殺傷細胞。

表1.已知的一些抗GPC3單克隆抗體

然而，仍然有強烈的需要繼續探索特異性針對GPC3的治療性抗體以用于肝癌，黑色素瘤，卵巢透明細胞癌、卵黃囊瘤、神經母細胞瘤等腫瘤的治療。令人期待的是，這些治療性抗體需要具有改善的特異性，腫瘤細胞殺傷毒性，HAMA問題，腫瘤殺傷所需的最小劑量等優點。

雙特異性抗體(BsAb)技術常被用于改善針對腫瘤的治療性抗體的功效：將腫瘤相關抗原特異的抗體與具殺傷腫瘤細胞功能的效應細胞的表面觸發分子特異的抗體偶聯構成的雙特異性抗體，可高效地將體內的免疫效應細胞富集于腫瘤細胞周圍，激活免疫效應細胞特異性地殺傷腫瘤細胞，從而起到治療腫瘤的目的。目前雙特異性抗體的制備有化學偶聯法，雜交瘤法和基因工程法三種。

化學偶聯法是先采用還原劑，使不同的兩種單克隆抗體或其片段解鏈，獲得單價抗體或抗體片段，再采用異雙功能交聯劑把兩種具有不同抗原特異性的單價抗體或其片段交聯在一起。該方法可快速，大量制備BsAb，但是在交聯過程中抗體時有失活，而且難于保證產物的均質性。