[發明專利]神經營養蛋白的純化

無效

• 申請號: 97199682.2
• 申請日: 1997-11-14
• 公開（公告）號: CN1237184A
• 公開（公告）日: 1999-12-01
• 發明（設計）人: L·E·伯頓;C·H·施梅爾策;J·T·貝克
• 申請（專利權）人: 基因技術股份有限公司
• 主分類號: C07K14/475
• 分類號: C07K14/475;C07K14/48;C07K1/20
• 代理公司: 上海專利商標事務所
• 代理人: 陳文青

1．一種從含有其它蛋白的混合物中分離神經營養蛋白的方法，該方法包括用疏水作用層析樹脂將神經營養蛋白與混合物中的其它蛋白分離開來。

2．根據權利要求1所述的方法，其中混合物包括該神經營養蛋白的錯折疊變體、蛋白水解加工不正確的變體或糖基化變體。

3．根據權利要求1所述的方法，其中分離包括將含有神經營養蛋白、該神經營養蛋白的錯折疊變體、蛋白水解加工不正確的變體或糖基化變體的混合物加樣到疏水作用層析樹脂上，在使神經營養蛋白與變體分離的條件下從樹脂中洗脫出神經營養蛋白。

4．根據權利要求1所述的方法，其中樹脂包含有苯基官能團。

5．根據權利要求1所述的方法，其中加樣到疏水作用層析樹脂上的混合物的pH為5到8。

6．根據權利要求1所述的方法，其中加樣到樹脂上的混合物的鹽濃度為0.5M到3M。

7．根據權利要求6所述的方法，其中加樣到樹脂上的混合物的鹽濃度為0.5M到2.5M。

8．根據權利要求7所述的方法，其中加樣到樹脂上的混合物有鹽濃度為0.7M的乙酸鹽或1.0M到2.5M的氯化鈉。

9．根據權利要求3所述的方法，其中洗脫緩沖液包含有有機溶劑。

10．根據權利要求9所述的方法，其中有機溶劑體積占5％到20％。

11．根據權利要求3所述的方法，其中洗脫緩沖液的pH為pH5到pH8。

12．根據權利要求3所述的方法，其中洗脫包括降低的鹽梯度。

13．根據權利要求1所述的方法，其中神經營養蛋白是NGF超家族中的蛋白。

14．根據權利要求12所述的方法，其中神經營養蛋白是NGF、NT-4/5或NT-3。

15．根據權利要求1所述的方法，其中神經營養蛋白從細菌培養制得，在使用疏水作用樹脂前使其在體外重折疊。

16．根據權利要求1所述的方法，其中神經營養蛋白從哺乳動物細胞培養中分離獲得。

17．根據權利要求1所述的方法，該方法還包括用高效陽離子交換層析樹脂從神經營養蛋白的化學變體中分離出神經營養蛋白。

18．根據權利要求17所述的方法，其中高效陽離子交換層析分離步驟包括將包含神經營養蛋白和該神經營養蛋白化學變體的混合物加樣到高效陽離子交換層析樹脂上，在能使神經營養蛋白與化學變體分離的條件下將神經營養蛋白從樹脂上洗脫下來。

19．根據權利要求18所述的方法，其中陽離子交換樹脂是SP-Sepharose?HP樹脂、聚天冬氨酸樹脂、聚磺乙基陽離子交換樹脂或Fractogel?EMD?SO3樹脂。

20．根據權利要求18所述的方法，其中對來自陽離子交換樹脂的含神經營養蛋白的洗脫液進行脫鹽或進行透析，然后用載體配制。

21．根據權利要求1所述的方法，該方法還包括用硅膠樹脂從其它蛋白中分離出神經營養蛋白。

22．一種從蛋白混合物中分離神經營養蛋白的方法，該方法包括用硅膠樹脂從其它蛋白中分離出神經營養蛋白。

23．一種從神經營養蛋白化學變體中分離神經營養蛋白的方法，該方法包括用高效陽離子交換層析來從其化學變體中分離出神經營養蛋白。

24．根據權利要求23所述的方法，其中在分離前神經營養蛋白及其變體幾乎是純的。

25．根據權利要求23所述的方法，其中樹脂是SP-Sepharose?HP樹脂、聚天冬氨酸樹脂、聚磺乙基陽離子交換樹脂或Fractogel?EMD?SO3樹脂。

26．根據權利要求23所述的方法，該方法還任選地包括用制備性反相液相層析樹脂從該神經營養蛋白錯折疊變體中分離出神經營養蛋白的步驟。

27．根據權利要求26所述的方法，其中樹脂含有C4官能團。

28．一種神經營養蛋白組合物，它用權利要求1、22或23所述的方法制得。