[發明專利]產生原生殖細胞和轉基因動物物種的方法

無效

• 申請號: 97180552.0
• 申請日: 1997-10-10
• 公開（公告）號: CN1241210A
• 公開（公告）日: 2000-01-12
• 發明（設計）人: J·A·皮德拉希塔;F·W·巴澤爾
• 申請（專利權）人: 得克薩斯農業及機械體系綜合大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06;A01K67/027
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 盧新華,齊曾度

1.培養非嚙齒類動物物種的原生殖細胞的方法，包括平板接種含非嚙齒類動物物種的原生殖細胞的一種組合物在密度為約1.5×10⁵細胞/平方厘米和約10⁶細胞/平方厘米之間的飼養細胞上，其培養基中包含有效量的堿性成纖維細胞生長因子。

2.權利要求1的方法，其中所述飼養細胞密度在約2×10⁵細胞/平方厘米和約5×10⁵細胞/平方厘米之間。

3.權利要求1或2的方法，其中所述飼養細胞是非S1/S14細胞或S1-m220細胞。

4.前述任一權利要求的方法，其中所述飼養細胞是STO飼養細胞。

5.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基不包括外源加入的可溶性干細胞因子。

6.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基不包括外源加入的白血病抑制因子。

7.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基不包括外源加入的可溶性干細胞因子并且不包括外源加入的白血病抑制因子。

8.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基包含濃度在約5納克/毫升和約100微克/毫升之間的堿性成纖維細胞生長因子。

9.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的子宮鐵蛋白。

10.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含濃度在約1納克/毫升和約100微克/毫升之間的子宮鐵蛋白。

11.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的α2-巨球蛋白。

12.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含濃度在約10納克/毫升和約10微克/毫升之間的α2-巨球蛋白。

13.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的對所述非嚙齒類動物是非必需的氨基酸。

14.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含濃度在約10nM和約250nM之間的對所述非嚙齒類動物是非必需的氨基酸。

15.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的L谷氨酰胺。

16.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含濃度在約0.1mM和約50mM之間的L-谷氨酰胺。

17.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的β-巰基乙醇。

18.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基進一步包含濃度在約1μM和約1mM之間的β-巰基乙醇。

19.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基包含有效量的堿性成纖維細胞生長因子和結合有效量的至少兩種以下物質：子宮鐵蛋白，α2-巨球蛋白，對所述非嚙齒類動物非必需的氨基酸，L-谷氨酰胺或β-巰基乙醇。

20.前述任一權利要求的方法，其中所述培養基包含Dulbecco改進的Eagle培養基，Ham’s?F10培養基或50∶50體積/體積的Dulbecco改進的Eagle培養基和Ham’s?F10培養基的混合物。

21.權利要求1的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的白血病抑制因子。

22.權利要求21的方法，其中所述培養基進包含濃度在約5納克/毫升和約100微克/毫升之間的白血病抑制因子。

23.權利要求1的方法，其中所述培養基進一步包含有效量的可溶性干細胞因子。

24.權利要求23的方法，其中所述培養基包含濃度在約1納克/毫升和約100微克/毫升之間的可溶性干細胞因子。

25.權利要求1的方法，其中所述培養基包含有效量的堿性成纖維細胞生長因子和結合有效量的子宮鐵蛋白，α2-巨球蛋白與白血病抑制因子。