[發明專利]有機化合物的或涉及有機化合物的改進

無效

• 申請號: 94100613.1
• 申請日: 1994-01-14
• 公開（公告）號: CN1053468C
• 公開（公告）日: 2000-06-14
• 發明（設計）人: 赫里特·揚范霍爾斯特;馬克·克羅伊格;維爾特·范德梅爾;埃里克·波斯特馬;羅布·阿比斯蒂
• 申請（專利權）人: Ｓ及Ｇ種子有限公司
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;C12N5/02;A01H4/00
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 張元忠

本發明涉及適于從組織培養中再生整個植株的改進的體細胞胚形成方法，更具體地講，涉及使用液體培養基本身通過體細胞胚形成而獲得體細胞胚的改進方法。

人們認為有效利用體細胞胚形成方法的商業化比(例如)有機生成的克隆更合乎需要，并且從經濟上講，它更吸引入，因為它具備在相對短的時間間隔內得到更高產量的植物的潛力。

已知當某些植物細胞在合適的植物組織培養基中培養時，它們具有分化為整個植株的潛力。這樣的培養基通常含有無機鹽、碳源(如蔗糖、肌醇、硫胺素等等)。普遍使用的植物組織培養基的實例是Murashiqe?and?Skoog(MS培養基)、Gamborg的Lindsmaier?andSkoog(B5培養基)，等等。

為了使所用的特定的植物細胞進行最佳生長，可以改變植物組織培養基的組成。幾乎所有植物細胞都需要植物激素，如生長素或類似生長素的化合物，如吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸或2，4-D，和/或細胞分裂素(如芐基腺嘌呤、玉米素、激動素)等。為了保證最理想的生長，加入如煙酸、吡哆素等維生素或其他組分(如椰子奶、酪蛋白水解產物等)也可能是有用的。

過去，真正的體細胞胚的形成需要使用愈傷組織材料，該愈傷組織材料含有具有非常大的液泡且未分化的細胞團粒以及較小的有非常小的液泡的圓細胞，以該愈傷組織材料作為最初生長階段材料并可從中衍生出細胞胚。但是在體細胞胚形成中使用這樣的材料作為起始材料有許多缺陷，已證明，在獲得大量具有基本相似的表型和/或在倍性水平方面基本一致的植物時，它的使用受到限制。起源于愈傷組織的植物，其體細胞克隆在倍性水平方面顯示有變異和/或不整齊。(ChaleffR.s.(1983)science?219：676-682；Larkin?P.J.(1987)Iowa?State?Journal?of?Research61(4)：393-434；De?Klerk?G-J(1990)Acta?Bot.Neerl.39(2)：129-144；Karp?A.&?Bright?S.W.J.(1985)OxfordSurveys?of?Plant?Molecular?&?Cell?Biology?2：199-234；Custers?J.B.M.et?al(1990)Acta?Bot.Neerl.39(2)：153-161(cucumis?sativus?L.)；Kysely?W.et?al(1987)Plantcell?Reports?6：305-308(pisum?sativum?L.)；Ezura?H.(1992)Plant?Science?85：209-213(cucumis?melo)；andKiviharju?E.et?al(1992)Plant?Cell，Tissue，and?OrganCulture?28：187-194(Cyclamen?persicum?Mill)].

已有已知的專利申請實例描述了愈傷組織材料在體細胞胚形成中的應用。例如，WO?90/01058(Plant?Genetics?Inc)描述了使用愈傷組織材料來獲得體細胞胚，同時考察了使用多種合成生長素的效果。將合適的外植體材料在固體培養基中培養和/或再次培養許多星期后即形成或長成愈傷組織，然后通過將愈傷組織轉移到含有諸如2，4-D或它的一種類似物的植物激素的培養基中即開始體細胞胚形成。沒有提及體細胞胚的倍性水平或獲得的植物的倍性水平。在體細胞胚形成中使用愈傷組織材料可能有助于獲得植物，其中獲得的體細胞克隆變體或許對豐富有用的基因庫有意義，但對簡單希望獲得具有基本相同的基因型的銷售量植物的種子商人和育種者來說則無甚用途。

公知已從由分生組織細胞組成的微團將胡蘿卜細胞系進行了克隆并研究了他們生成胚的能力(P.Coutos?Thevenot等，Plant?CellReports(1990)8：605-608)。