[發明專利]一種乳膠包被的肌鈣蛋白檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201310344773.7
• 申請日: 2013-08-07
• 公開（公告）號: CN103389385A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 李杰;李偉奇;房君江;張秀文;李剛;林清玉
• 申請（專利權）人: 上海睿康生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

?本發明涉及醫學免疫體外診斷領域，具體涉及一種乳膠包被的肌鈣蛋白檢測試劑盒。

背景技術

急性心肌梗塞（AMI）是發病率和死亡率較高的疾病之一。在諸多診斷AMI的酶學指標中，含M和B亞基的肌酸激酶同工酶（CK-MB）曾一度被認為是診斷的“金標準”而廣泛應用多年。隨著對心肌損傷標志物的不斷深入研究，逐漸發現若干靈敏性、特異性較好的標志物。其中，心肌肌鈣蛋白（cTn）以其優異的靈敏度和特異性正逐步取代CK-MB，成為判斷心肌損傷壞死的新的確定標志物。

cTn檢測主要用于心肌缺血損傷如急性冠狀動脈綜合征（包括隱性心絞痛和不穩定心絞痛以及AMI）等的臨床診斷、危害性估計和預后判斷，此外還可用于MI后溶栓治療效果判定；心肌缺血損傷面積的估計、臨床診斷心肌炎、心肌創傷（心臟手術）、圍手術期心臟并發癥、嚴重膿毒血癥或膿毒血癥導致的左心衰竭、充血性心功能不全，以及某些治療藥物的臨床療效觀察。cTn包括心肌肌鈣蛋白I(cTnI)和心肌肌鈣蛋白T(cTnT)兩種亞型。大量的臨床研究資料證實，cTnI或cTnT在檢測心肌損傷時的臨床價值相同。

膠乳顆粒增強比濁法是近年來出現的一種較為穩定、準確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法。PETIA法大體分為兩種。一種是散射比濁檢測法；另一種是透射比濁檢測法。這兩種方法的基本原理非常相似，都是在高分子膠乳微球的表面交聯單克隆抗體，當交聯有抗體的微球與抗原結合后，在短時間內會迅速聚集在一起，改變了反應液的散光性能或透光性能。而且，反應液散光性能或透光性能（即吸光度）的改變與被測抗原的濃度有較強的相關性,在一定范圍內可以反映被測抗原的濃度。PETIA檢測方法是在均相反應體系中進行抗原、抗體反應及結果的測定。抗原、抗體反應后，直接測定反應液的吸光度值，省卻了ELISA法反復孵育和洗板等煩瑣操作步驟，幾分鐘就能獲得結果，省時省力。此外，納米免疫比濁法操作步驟的簡化也相應地避免了許多人為操作因素和試劑、環境等外界因素的干擾，穩定性和重復性都較好，能較真實地反映被測物質的含量。免疫比濁法的靈敏度雖然比ELISA法差一些，但足于檢測到健康人血漿中許多標志蛋白的下限值，可完全滿足臨床檢測要求。

目前測定cTnI的常用方法有：酶聯免疫法吸附法、化學發光法、酶聯熒光分析法、膠體金免疫層析法和免疫比濁法。目前比較常用的方法是膠體金免疫層析法，但是此方法敏感性不好，重復性不好，尤其是只能作為定性檢查，對于臨床病人的療效觀察有一定的局限性。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳膠包被的肌鈣蛋白檢測試劑盒，它的重復性好，試劑穩定，操作簡便、靈敏度高、特異性好，測定快速、測定結果準確可靠。

為了解決背景技術所存在的問題，本發明采用以下技術方案：它是由試劑R1、試劑R2及校準品三部分組成，試劑R1為Tris緩沖體系，其組成為Tris緩沖液30-80mmol/l、聚乙二醇6000-10000?70-140mmol/l和乙二胺四乙酸二鈉15-30mmol/l；試劑R2為cTnI抗體包被的聚苯乙烯乳膠粒子致敏顆粒、Tris?緩沖液40-100mmol/l；校準品為0-130U/ml牛血清基質，還包括防腐劑0.2-2.2%、穩定劑1-10%，上述百分比為牛血清基質體積用量的百分比。

所述的試劑R2中的聚苯乙烯乳膠粒子為膠乳顆粒直徑在150-190nm之間。

所述的試劑R2抗體包被過程中cTnI抗體和聚苯乙烯膠乳包被質量比為1/10-5/10。

所述的試劑R2抗體包被過程中，封閉液組分包括0.5%-1.5%脫脂奶粉、20-60mm的甘氨酸。

所述的試劑R2抗體包被過程中，膠乳稀釋液組分包括?Tris?緩沖液30-80mmol/l，0.5%-1.5%脫脂奶粉，0.9%NaN3。

所述的校準品為心肌肌鈣蛋白cTnI濃度分別為1.56，3.13，6.25，12.5，25.0ng/ml的五支校準品。

所述的牛血清基質由無HBV、HIV、HAV、HCV、TP傳染源，同時添加甘油、蔗糖、BSA、甘露醇、山梨醇作為保護劑，疊氮鈉作為防腐劑。

????本發明具有以下有益效果：它的重復性好，試劑穩定，操作簡便、靈敏度高、特異性好，測定快速、測定結果準確可靠。

附圖說明：

圖1為本發明中試劑盒定標曲線圖；

圖2?為采用本發明試劑和國外某知名公司試劑血清相關性比對圖；

圖3為表1：本發明中實施1的中本發明試劑盒反應參數表；