[發明專利]檢測mRNA樣品加帽率的探針、試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202310852567.0
• 申請日: 2023-07-12
• 公開（公告）號: CN116590382A
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 邵熙;夏梅玲;胡偉;杜青青;肖志華
• 申請（專利權）人: 上海奧浦邁生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6816
• 分類號: C12Q1/6816;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 陸惠中

1.一種用于測定mRNA加帽率受RNase?H酶特異性切割的探針，其特征在于，所述探針設計形式為，RNA片段0-50nt+DNA片段1-10nt+RNA片段0-50nt，對DNA片段上的一個或多個堿基進行硒取代；所述硒取代是指脫氧核酸上磷酸根中的氧原子被硒原子取代；

所述探針與待測mRNA的5’端的特異區段反向互補；所述探針的DNA片段上未被硒代的部分受RNase?H快切酶特異性切割。

2.如權利要求1所述的一種用于測定mRNA加帽率受RNase?H酶特異性切割的探針，其特征在于，所述探針設計形式優選為，RNA片段0-50nt+DNA片段2-10nt+RNA片段0-50nt。

3.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括核酸分析專用流動相、核酸分析專用系統沖洗液和權利要求1所述的探針，所述試劑盒用于檢測mRNA加帽率；

所述核酸分析專用流動相和核酸分析專用系統沖洗液由全氟三乙胺與苯為原料配制。

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括以下組分：RNase?H快切酶、無核酶buffer套裝、高負載SA磁珠、無核酶低吸附耗材套裝和超高效寡核苷酸分離專用色譜柱。

5.如權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述無核酶buffer套裝包括溶液1：RNaseH?reaction?buffer；溶液2：0.1?M?NaCl；溶液3：5?mM?Tris-HCl，0.5?mM?EDTA，60?mMNaCl，pH?7.5；溶液4：100?μΜ?EDTA。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所述無核酶低吸附耗材套裝包括無核酶低吸附EP管，無核酶低吸附槍頭和無核酶低吸附樣品瓶。

7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒檢測mRNA加帽率的方法包括以下步驟：

S1：使用無核酶低吸附槍頭將待測的mRNA與探針以及溶液1混合在無核酶低吸附EP管中，按照退火程序退火；

S2：使用無核酶低吸附槍頭將高負載SA磁珠移取至無核酶低吸附EP管中，使用溶液2清洗磁珠；

S3：使用無核酶低吸附槍頭將退火后溶液同清洗后的磁珠混合，37?℃孵育30?min；

S4：使用無核酶低吸附槍頭移取RNase?H快切酶至S3溶液中，37?℃孵育3?h，酶解與磁珠相連的雜交雙鏈；

S5：使用溶液3清洗S4中的磁珠；

S6：使用無核酶低吸附槍頭移取溶液4與S5中的磁珠相混合，80?℃孵育3?min，轉移至磁力架上吸附，快速吸取上清液轉移至無核酶低吸附樣品瓶內；

S7：使用核酸分析專用系統沖洗液沖洗液質系統；

S8：將S6得到的mRNA片段利用核酸分析專用流動相通過超高效寡核苷酸分離專用色譜柱進行液質分析；

S9：對獲得的色譜質譜圖進行分析，計算加帽率。

8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，mRNA與所述探針的配比為1:10-10:1的范圍。

9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述高負載SA磁珠為30-3000?nm粒徑四氧化三鐵磁珠，包覆鏈霉親和素。