[發(fā)明專利]一種同時檢測CyHV-2和CyHV-3的雙重TaqMan熒光定量PCR引物和探針組及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310576195.3
• 申請日: 2023-05-22
• 公開（公告）號: CN116479187A
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳永聰;方勤美
• 申請（專利權(quán)）人: 福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 福州君誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

1.一種用于同時檢測鯉皰疹病毒2型和3型的雙重TaqMan熒光定量PCR引物和探針組，其特征在于，其由CyHV-2的上游引物CyHV-2-F、下游引物CyHV-2-R和探針CyHV-2-P以及CyHV-3的上游引物CyHV-3-F、下游引物CyHV-3-R和探針CyHV-3-P組成，所述CyHV-2-F、CyHV-2-R、CyHV-2-P、CyHV-3-F、CyHV-3-R、CyHV-3-P的核苷酸序列及修飾依次如下所示：

CyHV-2-F：CACCACCATCACCACCTAGTA；

CyHV-2-R：TCATCATCATCATCATCGGACTCT；

CyHV-2-P：FAM-ACCTGTGGTAGCGCCAGACCT-BHQ1；

CyHV-3-F：GCTATGCTGGAACTGGTGAT；

CyHV-3-R：CCTTGGACTCTTCGGTGTAG；

CyHV-3-P：VIC-CTGTAGGACAGACGCTCCAGCCGC-BHQ1。

2.一種用于同時檢測鯉皰疹病毒2型和3型的雙重TaqMan熒光定量PCR檢測試劑盒，其特征在于，其含有權(quán)利要求1所述的引物和探針組。

3.權(quán)利要求1所述的PCR引物和探針組在制備用于同時檢測鯉皰疹病毒2型和3型病毒的制劑中的用途。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述檢測包括：

（1）提取待測樣品DNA；

（2）以所述DNA為模板，使用權(quán)利要求1所述的引物和探針組進(jìn)行雙重TaqMan熒光定量PCR檢測；

雙重TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)體系如下：

Entrans?2X?qPCR?Probe?Mater?Mix?10μL；

CyHV-2-F：0.6μl，終濃度10?μmol/L；

CyHV-2-R：0.6μl，終濃度10?μmol/L；

CyHV-2-P：0.6μl，終濃度10?uM/L；

CyHV-3-F：1.0μl，終濃度10?μmol/L；

CyHV-3-R：1.0μl，終濃度10?μmol/L；

CyHV-3-P：0.6μl，終濃度10?uM/L；

模板DNA?2μl，加入ddH₂O將體系補足至20μl；

雙重TaqMan熒光定量PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性10min；循環(huán)反應(yīng)包括95℃?15s，60℃30s，共設(shè)置40個循環(huán)。