[發明專利]褐飛虱靶標融合基因NlCHS-Cht1及其具有高效致死作用的納米共遞送體系

在審

• 申請號: 202310568211.4
• 申請日: 2023-05-19
• 公開（公告）號: CN116590321A
• 公開（公告）日: 2023-08-15
• 發明（設計）人: 萬虎;何順;馬康生;高園園;李建洪
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/54;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/113;A01N43/88;A01N43/50;A01N59/16;A01N63/60;A01P7/04;C12R1/19
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馮超

1.一種褐飛虱靶標融合基因NlCHS-Cht1，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示。

2.一種重組載體pESI-T-NlCHS-Cht1，其特征在于：所述重組載體含有權利要求1所述褐飛虱融合基因NlCHS-Cht1的表達載體，其中，所述表達載體為pESI-T載體。

3.一種重組載體L4440-NlCHS-Cht1，其特征在于：所述重組載體含有權利要求1所述褐飛虱融合基因NlCHS-Cht1的表達載體，其中，所述表達載體為L4440。

4.一種含有權利要求4所述重組載體L4440-NlCHS-Cht1的宿主細胞，其特征在于：所述宿主細胞為HT115感受態細胞。

5.利用權利要求4所述宿主細胞誘導提取dsNlCHS-Cht1的方法，其特征在于：所述方法是將含有重組載體L4440-NlCHS-Cht1的宿主細胞培養，搖至OD600＝0.40左右加入IPTG，使其終濃度為1mM，進行誘導表達，37℃振蕩培養4h，提取細菌總RNA，純化后得到的dsRNA，即為dsNlCHS-Cht1。

6.一種具有高效致死作用的納米共遞送體系，其特征在于：所述納米化殺蟲劑的原料按重量份數比計包括1份的六水合硝酸鋅、13～14份的2-甲基咪唑、0.03～0.08份的噻嗪酮和0.05～0.2份的權利要求5所述方法制備得到的dsNlCHS-Cht1。

7.根據權利要求6所述具有高效致死作用的納米共遞送體系，其特征在于：所述納米化殺蟲劑的原料按重量份數比計包括1份的六水合硝酸鋅、13.86份的2-甲基咪唑、0.06份的噻嗪酮和0.10份的dsNlCHS-Cht1。

8.一種具有高效致死作用的納米共遞送體系的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)按重量份數比稱取1份的六水合硝酸鋅溶液、13～14份的2-甲基咪唑溶液、0.03～0.08份的噻嗪酮和0.05～0.2份的權利要求5所述方法制備得到的dsNlCHS-Cht1；

2)將六水合硝酸鋅和2-甲基咪唑分別溶于0.1％Triton?X-100水溶液中，分別得到六水合硝酸鋅Triton?X-100水溶液和2-甲基咪唑Triton?X-100水溶液；

3)將噻嗪酮溶液溶于二甲基亞砜DMSO中，得到噻嗪酮飽和DMSO溶液；

4)將dsNlCHS-Cht1加入六水合硝酸鋅Triton?X-100水溶液，室溫攪拌；得到反應溶液；然后向反應溶液中加入噻嗪酮飽和DMSO溶液，室溫攪拌混合均勻，最后加入2-甲基咪唑Triton?X-100水溶液室溫反應，反應結束后，離心收集納米顆粒，用去離子水和無水乙醇洗滌三次，真空干燥；最終得到具有高效致死作用的納米共遞送體系Buprofezin@dsNlCHS-Cht1@ZIF-8。

9.根據權利要求8所述具有高效致死作用的納米共遞送體系的制備方法，其特征在于：所述步驟4)中，離心轉速為10000rpm。

10.一種權利要求6所述的納米共遞送體系在防治褐飛虱中的應用。