[發明專利]血清4型禽腺病毒100K蛋白單克隆抗體10E12-E6-D12-F5的制備及應用

在審

• 申請號: 202310555270.8
• 申請日: 2023-05-17
• 公開（公告）號: CN116622643A
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 謝芝勛;鄧顯文;謝麗基;韋悠;謝志勤;羅思思;黃嬌玲;張民秀;范晴;王盛;曾婷婷;張艷芳
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區獸醫研究所
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/08;G01N33/569;G01N33/533;G01N33/535
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發明公開了血清4型禽腺病毒100K蛋白單克隆抗體10E12?E6?D12?F5的制備及應用。本發明提供了分泌FADV4抗體的雜交瘤細胞株10E12?E6?D12?F5，其保藏號為CCTCC?NO:C2022101。本發明還提供了由所述雜交瘤細胞株10E12?E6?D12?F5分泌的抗體及其應用。本發明成功研制了分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞10E12?E6?D12?F5。其中，10E12?E6?D12?F5這株雜交瘤細胞分泌的單克隆抗體，能特異地與I群禽腺病毒所有血清型以及本實驗室保存的另外18株FAdV?4分離株產生陽性反應，具有更廣泛的識別譜。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種血清4型禽腺病毒100K蛋白單克隆抗體10E12-E6-D12-F5的制備及應用。

背景技術

血清4型禽腺病毒(Fowl?adenovirus?serotype?4,FAdV-4)是引起高致病性和高傳染性心包積液肝炎綜合征的病原，感染的家禽出現急性死亡，病死率為20％-80％。FAdV-4感染能夠導致宿主免疫抑制，由此導致的免疫失敗、繼發感染、混合感染進一步加劇了心包積液肝炎綜合征的危害。2015年以前，該病在我國多地零星發現，但自2015年6月起，該病在我國河南、河北、安徽、山東、廣東、廣西和江蘇等多個省份呈暴發式流行。

據報道，2015年后我國流行的FAdV-4毒株毒力顯著增強，被定義為新型的FAdV-4，遺傳進化分析其與國外的FAdV-4毒株(包括非致病株ON1和KR5，致病株MX-SHP95)不在同一分支，其基因組的右端均出現1?966bp的缺失(包括ORF19、ORF48和ORF27基因的缺失)，主要結構蛋白Hexon、Penton和Fiber的氨基酸位點存在多處突變(與毒株毒力相關)，但100K基因的遺傳變異情況沒有相關的分析報道。

目前對于FAdV-4單克隆抗體的研究，均以penton、Fiber?2和Hexon這三個主要的結構蛋白為免疫原研制的。王萍等(2018)以FAdV-4全病毒免疫小鼠后，以Fiber-2原核表達產物為篩選抗原研發Fiber-2單克隆抗體，該單克隆抗體與FAdV-4反應為陽性，FAdV-8為陰性，其它血清型的FAdV的反應性未確定。劉娜等(2018)用Fiber-2和Hexon蛋白篩選單克隆抗體并研制膠體金試紙，該單克隆抗體與FAdV-4反應為陽性，其它血清型的FAdV的反應性未確定。侯力丹等(2022)將penton基因的原核表達蛋白為抗原免疫小鼠，篩選制備了penton單克隆抗體，該單克隆抗體可識別I群禽腺病毒的所有血清型代表毒株。

100K蛋白是FAdV-4的非結構蛋白，在病毒感染后期大量表達，能促進Hexon蛋白正確折疊，在病毒的感染和復制過程中發揮重要作用。以100K重組蛋白或單克隆抗體建立的血清學檢測方法，可區分FAdV-4病毒感染和滅活苗免疫產生的抗體，對于FAdV-4的凈化有技術支撐作用。目前還未見100K蛋白單克隆抗體的研究報道。

發明內容

本發明的目的是提供血清4型禽腺病毒100K蛋白單克隆抗體10E12-E6-D12-F5的制備及應用。

第一方面，本發明提供了分泌FADV4抗體的雜交瘤細胞株10E12-E6-D12-F5，其保藏號為CCTCC?NO:C2022101。

第二方面，本發明提供了由第一方面所述雜交瘤細胞株10E12-E6-D12-F5分泌的抗體。

上文所述抗體為單克隆抗體。

第三方面，本發明提供了第二方面所述抗體在如下任一種的應用：

1)制備檢測或輔助檢測禽腺病毒產品；

2)制備檢測或輔助檢測待測樣本是否含有禽腺病毒的產品；

3)制備結合FAdV4-100K蛋白的產品；

4)制備結合禽腺病毒的產品。