[發明專利]一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRNA檢測生物傳感器及檢測方法

在審

• 申請號: 202310549883.0
• 申請日: 2023-05-16
• 公開（公告）號: CN116574788A
• 公開（公告）日: 2023-08-11
• 發明（設計）人: 黃琳;周夢洋
• 申請（專利權）人: 安徽醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6825
• 分類號: C12Q1/6825;C12N15/11;C12N9/22
• 代理公司: 合肥兆信知識產權代理事務所(普通合伙) 34161
• 代理人: 汪洋

1.一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRNA檢測生物傳感器，其特征在于：包括：

sgRNA復合物，所述的sgRNA復合物通過納米材料、3’端修飾有生物素的復合物活性抑制探針、CRISPR-Cas9系統中的sgRNA之間的反應構建形成；

識別探針，所述的識別探針用于與脫氧核苷酸、聚合酶和外切酶配合，構建形成雜交反應體系，在雜交反應體系中，識別探針與標準品外泌體中釋放的特定microRNA進行雜交，并在脫氧核苷酸、聚合酶和外切酶的作用下，循環引發產生對應的信號核酸序列，信號核酸序列與所述的sgRNA復合物反應后，釋放sgRNA，分離出的sgRNA與Cas9蛋白結合，形成sgRNA最終復合物；

結合有熒光染料的靶標雙鏈DNA，所述的靶標雙鏈DNA用于與sgRNA最終復合物反應，生成附著有熒光染料的上清液，基于上清液的熒光值，建立熒光值與標準品外泌體中microRNA含量的相關線性曲線。

2.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRNA檢測生物傳感器，其特征在于：所述的復合物活性抑制探針具有用于與sgRNA的部分核酸序列進行互補的活性抑制核酸序列，且所述的活性抑制核酸序列還用于與引發產生的信號核酸序列進行互補。

3.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRNA檢測生物傳感器，其特征在于：所述的識別探針包括microRNA識別核酸序列、外切酶識別核酸序列以及信號引發核酸序列；

所述的microRNA識別核酸序列用于識別外泌體中釋放的特定microRN?A，并與其進行互補；

所述的信號引發核酸序列用于引發生成與其互補的信號核酸序列。

4.根據權利要求3所述的一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRN?A檢測生物傳感器，其特征在于：所述特定microRNA包括但不限于microR?NA-21、microRNA-141、microRNA-155、microRNA-200a、microRNA-203、microRNA-205、microRNA-210、microRNA-214。

5.根據權利要求1所述的一種基于CRISPR-Cas9系統的外泌體microRNA檢測生物傳感器，其特征在于：所述的納米材料采用納米磁珠。