[發明專利]一種增強免疫原性的碘標記納米抗體制備方法和應用

在審

• 申請號: 202310521529.7
• 申請日: 2023-05-10
• 公開（公告）號: CN116462759A
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 余飛;朱夢琴;張佳佳;楊夢蝶;張升虹;張瀟藝
• 申請（專利權）人: 上海市第十人民醫院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K1/13;A61K51/10;A61P35/00;A61K101/02
• 代理公司: 安徽致至知識產權代理事務所(普通合伙) 34221
• 代理人: 許朋波

本發明公開一種增強免疫原性的碘標記納米抗體制備方法，包括如下步驟：S1將Nasupgt;131/supgt;I和Nb109混合：取10μL濃度為10?mg/mL的Nb109溶液，加入1?2?mCi?Nasupgt;131/supgt;I，渦旋振蕩混合反應1分鐘；S2加入氯胺T溶液進行氧化反應：在S1溶液中加入15μL濃度為2?mg/mL氯胺T溶液，渦旋振蕩混合反應，靜置3分鐘；S3加入焦亞硫酸鈉溶液終止反應：在S2溶液中加入20μL濃度為2?mg/mL焦亞硫酸鈉溶液，渦旋振蕩混合反應1分鐘；S4產物經PD?10純化柱進行純化：將產物用PBS經PD?10純化柱淋洗，得到supgt;131/supgt;I?Nb109；S5對S4得到的supgt;131/supgt;I?Nb109采用紙層析法進行標記率和放射化學純度測定，同時，采用SDS?PAGE法檢測蛋白純度和分子量。本發明產物應用于非小細胞肺癌治療效果評估和增強免疫原性分析，具有較好的治療效果且安全性較高等優點。

技術領域

本發明涉及腫瘤靶向治療技術領域，尤其是一種增強免疫原性的碘標記納米抗體制備方法和應用。

背景技術

放射性藥物治療是指利用載體的組織靶向特異性將放射性核素運送到腫瘤部位，通過放射性核素釋放的射線對腫瘤產生殺傷作用。它是一種新興的、有效的、毒性較小的癌癥治療方式，尤其在轉移性癌癥的治療上，它可以克服傳統放療對正常組織的輻射暴露損傷。放射性藥物的載體包括單克隆抗體、小分子多肽和納米顆粒等。然而，單克隆抗體由于分子量大難以穿透實體腫瘤，且放射性核素標記的單克隆抗體體內循環時間長，可能導致血液和骨髓毒性;小分子多肽在體內清除速度快而不利于腫瘤治療;納米顆粒腫瘤靶向特異性和生物相容性低限制了其臨床應用。因此，選擇合適的腫瘤靶向載體遞送放射性核素是實施有效的放射性藥物治療的關鍵。

納米抗體來源于駱駝科，是重鏈抗體的可變結構域，其分子量約為15?kDa。與傳統單克隆抗體相比，納米抗體具有高親和力、高穩定性、水溶性好、腫瘤穿透性強等優點。因此，近幾年納米抗體在分子影像領域被廣泛應用于疾病診斷和治療。其中，基于納米抗體的放射性藥物不斷被開發，顯示出較好的治療效果。細胞程序性死亡-配體1（programmedcell?death?ligand?1,?PD-L1）作為一種腫瘤表面生物標志物在肺癌、宮頸癌、頭頸癌、泌尿系腫瘤等多種腫瘤中高度表達，且其作為免疫檢查點在腫瘤逃避免疫監測中發揮重要作用，這些特性使PD-L1成為腫瘤診斷和治療的理想靶點。

然而，關于靶向PD-L1的納米抗體被放射性碘標記在非小細胞肺癌治療中的作用仍不清楚。因此，研究放射性碘標記的PD-L1納米抗體的抗腫瘤效應對啟發臨床開發新的放射性藥物治療非小細胞肺癌是至關重要的。

另外，Nb109是一種靶向PD-L1的納米抗體，其與腫瘤PD-L1的作用不影響PD-L1抑制劑的治療效果，這使得基于Nb109的放射性藥物與PD-L1單克隆抗體聯合用于腫瘤治療成為可能，具有臨床轉化前景。

發明內容

為了解決上述現有技術中存在的現有載體實體瘤治療的弊端及碘標記PD-L1納米抗體在非小細胞肺癌的作用效果不明的問題，為此本發明提出一種增強免疫原性的碘標記納米抗體制備方法，其包含放射性碘和PD-L1納米抗體，并且提供用于非小細胞肺癌的治療，為非小細胞肺癌治療提供了新的方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：

一種增強免疫原性的碘標記納米抗體制備方法，包括如下步驟：

步驟S1：將Na¹³¹I和Nb109混合：取10?μL濃度為10?mg/mL的Nb109溶液,加入1-2mCi?Na¹³¹I，渦旋振蕩混合反應1分鐘；

步驟S2：加入氯胺T溶液進行氧化反應：在步驟S1溶液中加入15?μL濃度為2?mg/mL氯胺T溶液，渦旋振蕩混合反應，靜置3分鐘；

步驟S3：加入焦亞硫酸鈉溶液終止反應：在步驟S2溶液中加入20?μL濃度為2?mg/mL焦亞硫酸鈉溶液，渦旋振蕩混合反應1分鐘；