[發明專利]一種評價疾病T淋巴細胞慢性病理狀態的T細胞免疫學態標志物組合及其應用

在審

• 申請號: 202310435512.X
• 申請日: 2023-04-21
• 公開（公告）號: CN116430055A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 陳國純;陳慧慧;譚重慶
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅二醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569;G01N33/574;G01N33/58;G01N15/14
• 代理公司: 北京惟專知識產權代理事務所(普通合伙) 16074
• 代理人: 趙星

本發明提供一種評價疾病T淋巴細胞慢性病理狀態的T細胞免疫學態標志物組合及其應用，涉及疾病評價領域。包括CD3、CD4、CD8、FOXP3、CD25、CD127、TIM3、PS6等中的任意幾種。本發明通過檢測組合，涵蓋廣泛T細胞亞群的功能評價；本發明快速實現對T細胞的精準分型和免疫活性檢測，高靈敏度、高特異性評價T細胞慢性激活狀態；本發明系統評價疾病嚴重程度、治療效果、早期復發、感染風險、藥物對細胞免疫功能的影響；本發明操作簡單，結果易懂，易于在基層醫療機構推廣應用。

技術領域

本發明涉及疾病評價領域，特別是涉及一種評價疾病T淋巴細胞慢性病理狀態的T細胞免疫學態標志物組合。

背景技術

慢性疾病(感染、腫瘤、代謝性疾病、心血管疾病、神經系統疾病等)是威脅全球人類健康的最主要因素，而慢性系統性炎癥反應是所有慢性疾病的關鍵病生理機制之一。T細胞是調控人體免疫穩態的最重要效應細胞，根據其表面標志物及功能可分為多種不同亞型，并處于動態轉換過程中。T細胞持續激活狀態可通過分泌大量細胞因子導致系統性炎癥損傷，介導多種慢性疾病的發生、發展過程；另一方面，處于持續活化的T細胞不斷分泌大量細胞因子，最終導致細胞功能耗竭。一旦出現T細胞功能耗竭，免疫系統將發生持久而嚴重的損害，機體抵抗力低下，容易發生危及生命的重癥感染。對T細胞免疫表型及功能穩態做出及時準確的評估并調整治療方案是亟待解決的重大臨床問題。

臨床醫生常用的評價患者免疫功能及炎癥反應指標的方法主要依賴于傳統血液生化檢測項目(如血常規、免疫球蛋白、C-反應蛋白等)，普遍存在靈敏度和特異性不高、易受不同疾病因素影響等不足。流式細胞術是近年來醫學領域開展推廣的新型檢查技術，常見評價免疫功能指標包括CD3+T細胞基本分型檢測，流式細胞學檢測能夠篩選、分離、檢測患者的T細胞數量及比例，但是臨床實踐發現，目前流式細胞學檢測方案存在許多亟待改進的不足之處。首先，現有常用的流式細胞學分型檢測指標局限于T細胞的表面標志物(CD3，CD4，CD8)，僅能提示整體T細胞總數或比例的變化，難以精細反映各種T細胞亞群生物學功能變化及其慢性活化狀態，無法指導臨床醫生對患者T細胞功能及免疫穩態做出及時的判斷。

一直以來感染都是全人類健康的最嚴重威脅。正常T細胞免疫是抵抗各種外來病原菌入侵的最重要防線之一。在多種疾病狀態下，患者可能出現長期T細胞慢性激活，并最終導致T細胞功能耗竭的發生；同時，臨床上各種免疫干預治療方案也對T細胞功能產生顯著影響。T細胞功能異常可能導致致命性感染的發生。因此，及時、準確評估患者的T細胞慢性活化狀態對指導臨床醫生制定或調整治療方案至關重要，尤其對于需要長期使用免疫抑制劑方案治療的患者更是性命攸關的重大問題。

長期以來，臨床醫生習慣于使用血常規、免疫球蛋白等檢驗方法來判斷患者的免疫力水平。最近隨著流式細胞術的臨床應用推廣，能夠實現檢測CD4+和CD8+兩種不同T細胞。這些現有的生化檢測項目雖然能在一定程度上篩選出一部分存在明顯免疫力低下的患者(如明顯白細胞下降、低IgG血癥、CD4/CD8低值等)，但是絕大多數患者在發生免疫功能受損早期甚至較長一段時間內都不會發生白細胞或IgG水平下降。這是因為包括T細胞在內的免疫細胞在發生凋亡(一種程序性死亡過程)等病理性損傷前已經出現明顯的細胞生物學活性異常。此時，雖然免疫細胞(T細胞等)的數量還在正常范圍內，但其清除外來致病菌的保護功能已經顯著受損，以上檢測技術均不能及時反映出機體免疫力低下的實際情況，已無法滿足現代臨床醫學的要求。

多參數流式細胞術可根據熒光標記的抗體與T細胞表達的靶蛋白結合，檢測細胞所產生的熒光強度得出靶蛋白的表達水平，再根據靶蛋白在不同細胞中的表達水平不同，進而將一大類T細胞細分為具有不同功能的多個T細胞亞群。多參數流式細胞術可一次性檢測細胞的多個表面標志物，從而系統評價T細胞的數量、比例以及生物學功能，對患者疾病狀態、感染風險以及藥物療效等做出系統性判斷。但是，由于T細胞表面蛋白(標志物)數量眾多，且各種蛋白表達的不同時空組合所反映出的細胞生物學功能差異顯著，尤其在疾病進展及藥物治療過程中變化更大，形成幾何級數的組合變化可能性。如何發現具有臨床診斷意義的表達組合并根據其表達水平快速、準確的分析T細胞功能活性仍是目前未解決的臨床難題。