[發明專利]一種能誘導血漿干細胞分泌細胞因子的方法

在審

• 申請號: 202310411269.8
• 申請日: 2023-04-18
• 公開（公告）號: CN116463287A
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發明（設計）人: 徐子恩;弗萊德·范德里希;胡建杰
• 申請（專利權）人: 貝美緹（上海）健康科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789;C12P21/00
• 代理公司: 北京箐昱專利代理事務所(普通合伙) 16105
• 代理人: 張鋒

本發明涉及一種能誘導血漿干細胞分泌細胞因子的方法。本發明根據細胞培養及誘導培養需求，提供了一種完全培養基和一種誘導培養基，完全培養基中添加葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二鉀，各組分協同作用，在干細胞培養過程中初步完成誘導培養，促進細胞因子的分泌，提高細胞培養液中細胞因子的含量；誘導培養基以玉米素、轉鐵蛋白、海藻酸鈉、谷氨酰胺、葡萄糖為主要成分，能夠有效促進干細胞的細胞因子分泌，提高了培養液中細胞因子的含量，整個過程有利于細胞因子的收集和應用，易于操作，節約成本，便于商業化的生產各種細胞因子產品。

技術領域

本發明涉及細胞工程技術領域，具體為一種能誘導血漿干細胞分泌細胞因子的方法。

背景技術

細胞因子是由如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等免疫細胞和內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等非免疫細胞經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質。細胞因子一般通過結合相應受體調節細胞生長、分化和效應，調控免疫應答。細胞因子是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導多種細胞產生的低分子量可溶性蛋白質，具有調節固有免疫和適應性免疫、血細胞生成、細胞生長、APSC多能細胞以及損傷組織修復等多種功能。細胞因子可被分為白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長因子等。

干細胞作為一種具有自我更新能力的多潛能細胞，在培養過程中會產生各種細胞因子，為獲取更多的細胞因子，通常會對干細胞進行擴增增殖。傳統技術通過向干細胞培養基中添加誘導成分，刺激干細胞分泌細胞因子，通過改進誘導培養方法及誘導組合物，能夠很好的刺激干細胞分泌細胞因子。

發明內容

鑒于現有技術中所存在的問題，本發明公開了一種能誘導血漿干細胞分泌細胞因子的方法，包括步驟如下：

步驟一、選取T25培養瓶，加入完全培養基；

步驟二、取傳代培養的血漿干細胞，接種于T25培養瓶中的完全培養基中進行過培養；

步驟三、待細胞濃度融合至75％后，吸出培養瓶中的培養基，用PBS對細胞清洗2次，再向培養瓶中加入誘導培養基，繼續培養30-35小時，所述誘導培養基各組分以培養基終濃度計為：玉米素19-24mg/mL、轉鐵蛋白10-12mg/mL、海藻酸鈉51-54μg/mL、谷氨酰胺0.06-0.1mg/mL、葡萄糖1-10mg/mL、淫羊藿素0.3-0.5mg/mL、胰島素0.20-0.5mg/mL、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤0.5-1mmol/L、吲哚美辛0.2-0.8mmol/L；

步驟四、將培養瓶中的細胞及培養基均分轉移入兩個培養瓶中，同時補充誘導培養基進行擴培養，培養35-40小時，收集培養基，獲取細胞因子。

作為本發明的一種優選方案，步驟一中所述完全培養基為DMEM-HG/F12培養基中加入葡甲胺80-85ng/mL、右旋糖苷25-28μg/mL、甘草酸二鉀2-4mg/mL。

作為本發明的一種優選方案，步驟二血漿干細胞的接種密度為1-2×10⁵個/mL，誘導培養過程在37℃，4-5％CO₂，4-5％O₂的條件下進行。

本發明的有益效果：本發明根據細胞培養及誘導培養需求，提供了一種完全培養基和一種誘導培養基，完全培養基中添加葡甲胺、右旋糖苷、甘草酸二鉀，各組分協同作用，在干細胞培養過程中初步完成誘導培養，促進細胞因子的分泌，提高細胞培養液中細胞因子的含量；誘導培養基以玉米素、轉鐵蛋白、海藻酸鈉、谷氨酰胺、葡萄糖為主要成分，能夠有效促進干細胞的細胞因子分泌，提高了培養液中細胞因子的含量，整個過程有利于細胞因子的收集和應用，易于操作，節約成本，便于商業化的生產各種細胞因子產品。

具體實施方式

實施例1

本發明的一種能誘導血漿干細胞分泌細胞因子的方法，包括步驟如下：