[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202310359230.6
• 申請日: 2023-03-31
• 公開（公告）號: CN116514947A
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹莉莉;杜瑩;葉輝;郭蓉;吳旻杭;邱晉;李若男;楊心茹;任浩
• 申請（專利權(quán)）人: 山東第一醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院（山東省千佛山醫(yī)院）
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C12N15/12;C12N15/867;C12N5/10;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白及應(yīng)用，屬于基因編輯技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過刪減特定堿基序列成功構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型慢病毒載體，并在宮頸癌細(xì)胞內(nèi)驗證突變位點對該分子促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞增殖作用的影響，這為基因工程相關(guān)的基礎(chǔ)研究提供新思路，也為進(jìn)一步治療宮頸癌的基因工程藥物研發(fā)提供理論依據(jù)。另一方面，本發(fā)明研究驗證KLF14發(fā)揮作用的主要位點，KLF14鋅指結(jié)構(gòu)的存在促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞周期G0/G1期到S期的轉(zhuǎn)變，促進(jìn)細(xì)胞從靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)入DNA合成期，KLF14的鋅指結(jié)構(gòu)為宮頸癌治療的靶向藥物提供靶點，為宮頸癌的生物治療研究提供理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因編輯技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白及應(yīng)用。

背景技術(shù)

公開該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不必然被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已經(jīng)成為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

慢病毒載體在生物學(xué)及醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，尤其是基因治療、轉(zhuǎn)基因動物及基因敲除等相關(guān)基礎(chǔ)研究中，它能高效的將目的基因?qū)雱游锖腿说脑?xì)胞或細(xì)胞系，對分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，進(jìn)一步研究目的基因?qū)?xì)胞表型產(chǎn)生的影響。這些研究步驟大致相似，確定過表達(dá)或敲低的目的基因序列，通過酶切、連接等基因編輯技術(shù)構(gòu)建目的質(zhì)粒，選定慢病毒載體，進(jìn)一步進(jìn)行慢病毒包裝及滴度測定，感染至實驗細(xì)胞內(nèi)。

目前相關(guān)實驗研究大都是針對目的基因序列進(jìn)行過表達(dá)及敲低研究，對于目的基因本身可能發(fā)揮生物學(xué)功能的區(qū)域缺乏針對性，不能夠?qū)罄m(xù)藥物研發(fā)提供更精確的指導(dǎo)。譬如，對轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行研究時，轉(zhuǎn)錄因子與啟動子結(jié)合發(fā)揮相關(guān)作用，而轉(zhuǎn)錄因子蛋白結(jié)合啟動子這一特定堿基序列時，往往需借助其特定的蛋白結(jié)構(gòu)如鋅指結(jié)構(gòu)，僅對轉(zhuǎn)錄因子全序列進(jìn)行基因編輯，而不是針對性地對可能發(fā)揮作用的具體結(jié)構(gòu)域進(jìn)行編輯，導(dǎo)致對精準(zhǔn)藥物研究的指導(dǎo)價值大打折扣。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有實驗研究中慢病毒載體缺乏對潛在發(fā)揮功能的蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行針對性編輯這一現(xiàn)象，本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白及應(yīng)用，在構(gòu)建慢病毒過程中，針對性地編輯了目的基因KLF14可能發(fā)揮生物學(xué)功能的區(qū)域即鋅指結(jié)構(gòu)，進(jìn)一步研究不同鋅指結(jié)構(gòu)的缺失對細(xì)胞增殖功能主要是細(xì)胞周期所產(chǎn)生的影響。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：

本發(fā)明的第一方面，提供一種轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白，所述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白是如下(a1)-(a3)中的任一種：

(a1)SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(a2)SEQ?ID?NO.2所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；

(a3)SEQ?ID?NO.3所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)。

本發(fā)明的第二方面，提供編碼上述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白的基因，所述基因的核苷酸序列為如下(b1)-(b3)中的任一種：

(b1)SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列；

(b2)SEQ?ID?NO.5所示的核苷酸序列；

(b3)SEQ?ID?NO.6所示的核苷酸序列。

本發(fā)明的第三個方面，基于上述編碼上述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白的基因所設(shè)計的擴(kuò)增引物、含有編碼上述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白的基因的重組表達(dá)載體和/或含有編碼上述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白的基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞亦在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。

本發(fā)明的第四方面，提供上述轉(zhuǎn)錄因子KLF14鋅指結(jié)構(gòu)突變型蛋白、基因、重組表達(dá)載體或轉(zhuǎn)化細(xì)胞在具有如下任意一種或多種功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用；