[發明專利]一種脫細胞心包膜及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 202310317883.8
• 申請日: 2023-03-23
• 公開（公告）號: CN116077739A
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 劉路通;郭文靜;冉永峰;江濤;李志宏
• 申請（專利權）人: 杭州華邁醫療科技有限公司
• 主分類號: A61L31/00
• 分類號: A61L31/00;A61L31/14
• 代理公司: 北京柏杉松知識產權代理事務所(普通合伙) 11413
• 代理人: 劉繼富;王春偉

本申請提供了一種脫細胞心包膜的制備方法，采用特定的前處理、消毒、脫脂、脫細胞以及凍干處理相結合的方法，在有效去除動物組織抗原性物質的同時，還能最大限度的保留材料中生物活性成分和結構的完整性，同時在制備過程中還可以有效復合預防粘連產生的無機金屬離子、多糖和藥物，制備得到的脫細胞心包膜具有天然的粗糙面和光滑面，光滑面的纖維結構緊密，能有效阻隔粘連組織的侵入，且不影響肌腱的功能；粗糙面允許組織長入，利于快速血管化，修復肌腱；同時脫細胞心包膜負載功能性成分，起到更好的促進肌腱愈合和預防粘連產生的效果。

技術領域

本申請涉及生物醫用材料技術領域，特別是涉及一種脫細胞心包膜及其制備方法和用途。

背景技術

肌腱損傷后粘連形成是臨床上難以解決的問題，由于缺乏有效的粘連防治措施，常常使治療陷入“粘連—松解—再粘連”的惡性循環，嚴重影響了患者的肢體功能康復。應用物理屏障阻斷外源性愈合是預防肌腱粘連的主要方法，早期應用的非生物材料如硅膠、金箔等，因存在組織反應大、排異明顯、無通透性、影響肌腱的內源性愈合、需二次手術取出等不足，已被淘汰。隨著材料科學的發展，研究者們將研究轉向了可吸收高分子化合物，如殼聚糖、透明質酸及其衍生物、膠原、絲素蛋白、聚乳酸。可吸收高分子化合物本身所具有的良好的降解性和生物相容性，允許營養物質、細胞因子等通過，不會影響局部肌腱營養，在肌腱防粘連的預防中取得了更好的效果。然而這些傳統的材料仍區別于天然的組織結構，存在種種不足。

隨著再生醫學與組織工程技術的發展，對肌腱防粘連膜的功能和結構提出了越來越高的要求，除了具有良好的生物相容性和防粘連效果，還要具備與細胞外基質相似的作用，為細胞提供特殊的生理條件，以產生所需的細胞反應，促進損傷肌腱的功能修復。脫細胞基質材料因其保持了與細胞外基質固有的結構和成分，具有較高的生物活性和較低的免疫原性，在組織工程領域受到了廣泛關注。目前，通過脫細胞技術獲得的脫細胞基質材料已廣泛用于人體組織重建，如心臟瓣膜、皮膚和硬腦膜等。脫細胞心包膜具有優異的生物相容性和組織粘附性，與此同時，脫細胞心包膜很好的保持了天然組織致密的膠原結構和力學性能，可以有效屏障外源性愈合，便于手術操作。但目前已報道的用于肌腱修復和預防粘連產生的脫細胞心包膜大多作用單一，效果并不理想。因此，需要開發效果更好的脫細胞心包材料制備肌腱防粘連膜，以及有多功能的肌腱防粘連產品，實現更好治療效果。

發明內容

本申請的目的在于提供一種脫細胞心包膜及其制備方法，用以解決肌腱損傷后粘連形成問題。

本申請第一方面提供了一種脫細胞心包膜的制備方法，其包括以下步驟：

前處理：取新鮮的動物心包組織，去除附屬脂肪，獲得心包組織；

消毒：按照料液質量體積比1g：1-10mL將所述心包組織與消毒劑混合，處理1-4小時；其中，所述消毒劑選自0.1-0.2wt％過氧乙酸溶液、0.01-0.1wt％二氧化氯溶液，1-10wt％過氧化氫溶液中的至少一種；

脫脂：按照料液質量體積比1g：1-10mL將所述心包組織與脫脂劑混合，超聲處理1-4小時；其中，所述脫脂劑選自100wt％異丙醇溶液、100wt％丙酮溶液、0.1-1mol/L氫氧化鈉溶液、0.1-1mol/L氫氧化鉀溶液中的至少一種；

脫細胞：按照料液質量體積比1g：1-10mL將所述心包組織與脫細胞試劑混合，處理1-48小時；再按照料液質量體積比1g：1-10mL將脫細胞試劑處理后的心包組織與1-10U/mL脫氧核糖核酸酶(DNase)溶液混合，處理2-48小時，得到脫細胞心包膜；其中，所述脫細胞試劑選自0.1-1mol/L氫氧化鈉溶液、0.1-1wt％胰蛋白酶溶液、0.1-2wt％Triton?X-100(曲拉通)溶液、0.1-1wt％脫氧膽酸鈉溶液中的至少一種；

凍干處理：將所述脫細胞心包膜在-20℃～-80℃冷凍固定1-4小時，置于冷凍干燥機工作室，開啟冷凝室制冷，使冷凝室溫度達到-10℃～-56℃，開啟真空泵，真空冷凍干燥。