[發明專利]一種獅子魚毒素蛋白及其分離純化方法、應用

在審

• 申請號: 202310309746.X
• 申請日: 2023-03-28
• 公開（公告）號: CN116355070A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 李榮鋒;李鵬程;于華華;劉松;劉元杰;呂保磊
• 申請（專利權）人: 中國科學院海洋研究所
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;C07K1/14;C07K1/16;A61K45/00;A61P39/02
• 代理公司: 青島華慧澤專利代理事務所(普通合伙) 37247
• 代理人: 馬千會

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種獅子魚毒素蛋白及其分離純化方法、應用。一種獅子魚毒素蛋白，由兩個亞基組成；該兩個亞基的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.12所示。本發明首次從獅子魚(Pterois?volitans)毒液中分離出的毒素蛋白，有兩個亞基組成，具有強致死毒性；本發明分離得到的毒素蛋白為獅子魚毒素的深入研究和開發獅子魚蜇傷治療藥物奠定基礎；本發明僅使用Superdex?200increase10/300GL的凝膠過濾色譜柱一步純化即可從獅子魚毒液中分離出毒素蛋白，具有效率高和分辨率高等優點。

技術領域

本發明屬于生物化學技術領域，具體涉及一種獅子魚毒素蛋白及其分離純化方法、應用。

背景技術

獅子魚屬于鲉形目鲉科蓑鲉屬硬骨魚，是一種有毒的海洋動物。獅子魚(Pteroisvolitans)的背部長有13根毒棘，毒腺位于毒刺上的兩個凹槽內，能夠分泌毒素，刺破皮膚后可將毒液注入到人或其他動物體內，用于實現防御功能。人類被蜇傷后會導致極度疼痛，出汗，呼吸困難，甚至癱瘓，甚至死亡等嚴重后果。

獅子魚的毒液主要是多種蛋白質類毒素、乙酰膽堿等組成的復雜混合物。目前研究證明獅子魚的毒液具有多種毒性作用，包括神經毒性、溶血活性、磷脂酶活性、金屬蛋白酶活性等，并對小鼠有強烈的致死作用。但是，目前獅子魚毒液的導致致死作用的關鍵毒素蛋白不清晰，其主要的毒性作用和作用機制也不明確，更沒有針對獅子魚蜇傷的急救藥物。其主要原因是主要局限于目前尚未建立從獅子魚毒液中分離致死毒素蛋白的純化方法，無法獲得純凈的獅子魚的致死毒素，并對其進行性質和功能及其解毒劑的研究。本申請首次建立了從獅子魚毒液中分離純化致死毒素蛋白的方法，為深入研究獅子魚毒素蛋白的結構、功能、作用機制及其解毒藥物的研制奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供一種從獅子魚(Pterois?volitans)毒液中分離致死毒素的方法，及通過該方法從獅子魚(Pterois?volitans)毒液中分離出的毒素蛋白，為獅子魚致死毒素的深入研究和開發獅子魚蜇傷治療藥物奠定基礎。

為實現上述目的，本發明首先提供的技術方案是：一種獅子魚毒素蛋白，由兩個亞基組成；該兩個亞基的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.12所示。

優選地，所述獅子魚毒素蛋白從獅子魚的毒液中分離得到。

本發明還提供了所述獅子魚毒素蛋白的分離純化方法，包括以下步驟：

(1)將獅子魚毒液經低溫高速離心，收集上清液待用；

(2)將步驟(1)所得上清液泵入到Superdex?200increase10/300GL凝膠過濾色譜柱在低溫下進行分離，采用緩沖液進行沖洗，收集洗脫體積區間12.21ml-13.49ml洗脫液，獲得獅子魚毒素蛋白。

優選地，所述步驟(2)所用的洗脫液為20-50mM，pH?7.0-8.0，PBS，0.15M?NaCl；洗脫體積為24-36mL，流速為0.5-1mL/min，溫度為2-6℃。

本發明還提供了所述獅子魚毒素蛋白在開發獅子魚蜇傷治療藥物中的應用。

與現有技術相比，本發明具有如下有益效果：

1.本發明首次從獅子魚(Pterois?volitans)毒液中分離出的毒素蛋白，由兩個亞基組成，具有強致死毒性；

2.本發明分離得到的毒素蛋白為獅子魚毒素的深入研究和開發獅子魚蜇傷治療藥物奠定基礎；

3.本發明僅使用Superdex?200increase?10/300GL的凝膠過濾色譜柱一步純化即可從獅子魚毒液中分離出毒素蛋白，具有效率高和分辨率高等優點。

附圖說明