[發(fā)明專利]一種用于人類CYP2D6基因型檢測(cè)的反應(yīng)液及試劑盒

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202310265712.5
• 申請(qǐng)日: 2023-03-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN116042864A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李紅東;朱牧孜;王鴻;鄧波;付小妮;范亮波;馬西亞;郭曉榮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西安天隆科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/6858
• 代理公司: 成都九鼎天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 51214
• 代理人: 胡東東

本發(fā)明公開(kāi)了一種用于人類CYP2D6基因型檢測(cè)的反應(yīng)液及試劑盒，用以CYP2D6基因c.1846GA、c.100CT、c.1758GA、c.2988GA四個(gè)SNP位點(diǎn)的基因型檢測(cè)，所述反應(yīng)液包括四個(gè)SNP位點(diǎn)的特異性引物、Taqman探針、內(nèi)標(biāo)引物和探針、Taq酶、dNTPs、及緩沖溶液。通過(guò)對(duì)四個(gè)位點(diǎn)的引物以及引物探針組的濃度進(jìn)行設(shè)計(jì)，使得各位點(diǎn)及內(nèi)標(biāo)基因的擴(kuò)增效率一致，便于后期結(jié)果判讀。本發(fā)明試劑盒具有極高的特異性和檢測(cè)效率，能夠在4個(gè)反應(yīng)體系閉管中完成，極大降低了操作強(qiáng)度，可實(shí)現(xiàn)1小時(shí)左右出結(jié)果，涵蓋檢測(cè)多個(gè)位點(diǎn)，為臨床醫(yī)生提供了更多的患者基因信息。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于人類CYP2D6基因型檢測(cè)的反應(yīng)液及試劑盒。

背景技術(shù)

細(xì)胞色素P450超家族(CYP)是藥物Ⅰ相代謝酶中重要的酶系，負(fù)責(zé)生物體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)和多種藥物的代謝。CYP2D6是CYP450酶第二亞家族中的重要成員，參與了多種精神類藥物的代謝，CYP2D6酶活性存在顯著的個(gè)體差異，表現(xiàn)為酶活性升高、下降或完全失活，根據(jù)CYP2D6酶活力的差異可將個(gè)體分為四個(gè)代謝表型，不同代謝表型的個(gè)體在藥物代謝能力上表現(xiàn)出明顯的差異，直接影響了個(gè)體的藥物療效或藥物毒副作用。CYP2D6*4等位基因中特有的c.1846GA位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致CYP2D6基因的剪接缺陷，致使酶活性的喪失。CYP2D6*10等位基因最重要的突變位點(diǎn)c.100CT，可導(dǎo)致CYP2D6基因中間代謝型(IM)。CYP2D6*14等位基因?qū)|方人群CYP2D6酶活性的影響更為顯著，特有的位點(diǎn)c.1758GA的檢測(cè)有助于判斷個(gè)體是否攜帶該等位基因。CYP2D6*41等位基因中特有的位點(diǎn)c.2988GA已被證實(shí)與CYP2D6的異常剪接有關(guān)，這種剪接缺陷會(huì)導(dǎo)致一些轉(zhuǎn)錄RNA的外顯子6的缺失，從而導(dǎo)致酶的活性降低。這些等位基因型會(huì)導(dǎo)致CYP2D6酶活性有不同程度的降低或喪失，使患者服用藥物(如5-羥色胺再攝取抑制劑類等)時(shí)易發(fā)生毒副反應(yīng)。

相較于單位點(diǎn)檢測(cè)，多位點(diǎn)同時(shí)檢測(cè)能夠提高檢測(cè)通量，節(jié)省試劑、時(shí)間及人員、儀器成本。在多重PCR反應(yīng)中，由于不同引物對(duì)之間的雜交動(dòng)力學(xué)性質(zhì)不同，同一擴(kuò)增體系內(nèi)多個(gè)靶點(diǎn)之間擴(kuò)增條件不兼容，擴(kuò)增效率不一致，從而導(dǎo)致結(jié)合效率低的PCR產(chǎn)物減少，使得本應(yīng)該被擴(kuò)增的產(chǎn)物沒(méi)有出現(xiàn)；此外，多重PCR中的不同擴(kuò)增片段還會(huì)互相競(jìng)爭(zhēng)資源，導(dǎo)致高豐度模板能夠被很容易的檢測(cè)到，而低豐度的模板徹底淪為背景，存在漏檢風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明目的在于：針對(duì)上述存在的問(wèn)題，提供一種用于人類CYP2D6基因型檢測(cè)的反應(yīng)液及試劑盒，本發(fā)明的反應(yīng)液及試劑盒在同一體系內(nèi)實(shí)現(xiàn)了CYP2D6多個(gè)基因型位點(diǎn)的擴(kuò)增效率一致的檢測(cè)效果，克服了現(xiàn)有技術(shù)在進(jìn)行多位點(diǎn)同時(shí)檢測(cè)時(shí)所存在的不足。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：所述反應(yīng)液至少包括體系1反應(yīng)液，所述體系1反應(yīng)液包括CYP2D6基因各位點(diǎn)引物組、各位點(diǎn)公用引物、各位點(diǎn)Taqman探針、內(nèi)標(biāo)引物和探針、Taq酶、dNTPs、緩沖溶液和H₂O；其中，所述CYP2D6基因各位點(diǎn)引物組包括CYP2D6基因c.1846GA位點(diǎn)的野生型引物、或/和c.1846GA位點(diǎn)的突變型引物、或/和c.100CT位點(diǎn)的野生型引物、或/和c.100CT位點(diǎn)的突變型引物、或/和CYP2D6基因c.1758GA位點(diǎn)的野生型引物、或/和CYP2D6基因c.1758GA位點(diǎn)的突變型引物、或/和CYP2D6基因c.2988GA位點(diǎn)的野生型引物、或/和CYP2D6基因c.2988GA位點(diǎn)的野生型引物。

進(jìn)一步，由于CYP2D6基因c.1846GA位點(diǎn)與c.1758GA位點(diǎn)在基因組上物理位置較近，因此這兩個(gè)位點(diǎn)需分開(kāi)進(jìn)行檢測(cè)，故c.1846GA位點(diǎn)的野生型引物及其突變型引物，與c.1758GA位點(diǎn)的野生型引物及其突變型引物不設(shè)置在同一體系反應(yīng)液中。