[發明專利]一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體

在審

• 申請號: 202310218532.1
• 申請日: 2019-02-25
• 公開（公告）號: CN116355843A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 梁曉燕;方叢
• 申請（專利權）人: 梁曉燕;方叢
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/075
• 代理公司: 北京騰遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11608
• 代理人: 劉海鵬

本發明提供了一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體，屬于生物醫學工程技術領域，母體自身的骨髓間充質干細胞的線粒體的功能良好，注射到卵母細胞后可以改善卵母細胞的質量；骨髓間充質干細胞的線粒體是通過以下步驟進行提取：復蘇骨髓間充質干細胞，進行消化處理；消化后，骨髓間充質干細胞收集到容器中；離心棄上清，再向容器中加入PBS緩沖液進行重懸；骨髓間充質干細胞懸浮后，離心棄上清；向容器中加入預冷的Mito?CytoBuffer進行重懸，重懸后轉移至另一容器中；對骨髓間充質干細胞混合液進行多次抽吸；骨髓間充質干細胞的勻漿物轉移到另一容器中，離心、收集上清液；對上述步驟收集的上清液繼續離心，收集上清液；重復上述步驟。

本申請是名為《骨髓間充質干細胞的線粒體在改善卵母細胞藥物中的應用》的專利申請的分案申請，原申請的申請日為2019年02月25日，申請號為201910139497.8。

技術領域

本發明涉及生物醫學工程技術領域，特別是涉及一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體。

背景技術

卵子質量差是導致輔助生殖反復失敗的重要原因。線粒體數目的減少與卵母細胞衰老有關，功能障礙的線粒體會影響卵母細胞成熟的晚期階段和早期胚胎形成。因此，關于改善卵子質量的研究主要集中在改善線粒體的功能上。

研究或臨床應用階段用于改善卵子質量的方法有：1)線粒體活化劑：生長激素、輔酶Q10、白藜蘆醇、左旋肉堿、α-硫辛酸，其中，臨床常用生長激素、輔酶Q10改用于善卵子質量，其余活化劑應用較少；2)線粒體替代治療：細胞漿移植、核移植、紡錘體移植和極體移植；線粒體替代治療還處于實驗研究階段，未進入臨床應用中。

目前，暫無有效改善卵子質量的藥物或方法；原因在于上述兩種方法均存在許多不足：1)線粒體活化劑療效不確切、不顯著，效果有限；2)在線粒體替代治療中，異體細胞移植因會形成三親胚胎的倫理問題；3)在線粒體替代治療中，不同個體來源的線粒體DNA與核基因組合后，暫無系統評估后代的健康風險，不可預測；4)線粒體替代治療的效果不穩定。

因此，有必要研發一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的是提供一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

一種用于改善卵母細胞質量的自體線粒體，包含骨髓間充質干細胞的線粒體；所述卵母細胞的線粒體功能差；所述骨髓間充質干細胞的線粒體是通過以下步驟進行提取：

S1)復蘇骨髓間充質干細胞，進行消化處理；消化后，骨髓間充質干細胞收集到容器中；

S2)離心棄上清，再向容器中加入PBS緩沖液進行重懸；骨髓間充質干細胞懸浮后，離心棄上清；

S3)向容器中加入預冷的Mito-CytoBuffer進行重懸，重懸后轉移至另一容器中，并放入冰塊；對骨髓間充質干細胞混合液進行多次抽吸；

S4)將骨髓間充質干細胞的勻漿物轉移到另一容器中，離心、收集上清液；

S5)對步驟S4收集的上清液繼續離心，收集上清液；

S6)重復步驟S5；

在步驟S1之前還包括：骨髓間充質干細胞的分離、接種；所述骨髓間充質干細胞的分離、接種的具體步驟包括：

1)在骨髓血樣中加入PBS混勻，用離心管分裝2管ficoll淋巴細胞分離液，將稀釋骨髓緩慢加入ficoll液面上，水平離心機進行離心；

2)從界面上取出的MNC并加入離心管內；

3)加入PBS重懸，離心后棄上清；重復一次該步驟，并細胞計數；