[發明專利]一種檢測cTnI的比色催化雙模式免疫層析試紙條制備及檢測方法

在審

• 申請號: 202310165204.X
• 申請日: 2023-02-27
• 公開（公告）號: CN116430034A
• 公開（公告）日: 2023-07-14
• 發明（設計）人: 陳銳;宋明軒;程偉;丁世家;陳奕蓉;張露;曾子杰;高鑫;張崧之;李春陽;付慶
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/58;G01N33/68
• 代理公司: 重慶智慧之源知識產權代理事務所(普通合伙) 50234
• 代理人: 高彬

本發明提供一種檢測cTnI的比色催化雙模式免疫層析試紙條制備及檢測方法，(HRP@ZIF?8)supgt;X/supgt;@PDA@Ab/HRP納米標記探針包括以HRP@ZIF?8為核依次外延生長HRP@ZIF?8形成的(HRP@ZIF?8)supgt;X/supgt;、包覆在所述(HRP@ZIF?8)supgt;X/supgt;外層的聚多巴胺涂層，所述聚多巴胺涂層表面偶聯有抗體和游離的HRP分子。通過外延生長在HRP@ZIF?8外面封裝多層HRP@ZIF?8，使得單個ZIF?8顆粒內可以封裝更多的HRP分子，使得試紙條同時兼具比色強度和催化活性。

技術領域

本發明屬于免疫層析檢測技術領域，具體涉及一種檢測cTnI的比色催化雙模式免疫層析試紙條制備及檢測方法。

背景技術

比色側流免疫分析(LFIA)由于其獨特的優點，在POCT檢測領域受到越來越多的關注，它具有快速、簡單、不需要昂貴儀器等特點。例如，金納米粒子(AuNPs)標記的LFIA在快速篩選SARS-CoV-2特異性抗原和抗體以抑制其廣泛流行方面發揮著極其重要的作用。然而，傳統AuNPs標記的LFIA在10-40nm處的比色信號亮度較弱，在識別低濃度目標時靈敏度不夠，極大地限制了其應用。基于AuNPs的比色LFIA的檢測靈敏度比化學發光、電化學發光、時間分辨熒光、酶聯免疫吸附等方法低約3個數量級，因此迫切需要一種能夠測定痕量分析物的超靈敏比色LFIA。

具有比色性和催化活性的比色催化納米配合物被認為是設計和開發靈敏比色LFIA的新型比色探針。目前，具有內在催化活性的納米復合物主要包括辣根過氧化物酶(HRP)基、類過氧化物酶活性金屬基(如Fe₃O₄和鉑)和類過氧化物酶活性非金屬基(如碳)納米復合物。在眾多的比色催化納米復合物中，HRP基納米復合物作為一種很有前景的信號報告基團，因其具有保持HRP高催化活性的能力，在比色LFIA中受到越來越多的關注。然而，酶在納米粒子表面的固定化仍然面臨著許多挑戰，包括負載效率低和酶的催化活性中心受阻等。

提高HRP酶的穩定性、負載效率和反應效率是擴大其應用范圍的關鍵。近年來，許多研究者報道了金屬有機骨架(MOFs)，如沸石-咪唑骨架-8(ZIF-8)和ZIF-67，作為載體負載HRP酶來解決這些難題。與傳統載體(如AuNPs)相比，MOFs具有可裁剪的孔道、較大的比表面積和可調節的化學組成等獨特優勢，可以更好地固定天然酶。與水相中游離酶相比，將天然酶直接包埋到MOFs顆粒中具有更高的活性和操作穩定性。然而，直接將酶包埋在單個空間間隔的MOF顆粒中所獲得的酶包埋量和納米復合物尺寸難以滿足開發高靈敏度LFIA的需要。另外，作為固定化酶保護網絡的MOF材料的比色信號亮度很弱。因此，如何合理地設計出粒徑合適、酶負載量高、催化活性高、比色信號亮度強的理想的酶-MOF納米復合物仍然是一個巨大的挑戰。

發明內容

為了解決現有技術中的問題，本發明提供一種逐殼外延生長多層封裝辣根過氧化酶的納米標記材料兼具比色催化雙模式檢測的免疫層析試紙條制備及檢測方法。

本發明解決其技術問題是采用以下技術方案實現的：

本發明第一個目的在于提供一種(HRP@ZIF-8)^X@PDA@Ab/HRP納米標記探針，其特征在于：包括以HRP@ZIF-8為核依次外延生長HRP@ZIF-8形成的(HRP@ZIF-8)^X、包覆在所述(HRP@ZIF-8)^X外層的聚多巴胺涂層，所述聚多巴胺涂層表面偶聯有抗體和游離的HRP分子。

進一步的，(HRP@ZIF-8)^X@PDA@Ab/HRP中X＝3。

進一步的，所述HRP@ZIF-8為辣根過氧化物酶HRP封裝在ZIF-8顆粒內部得到的。

本發明第二個目的在于提供一種檢測cTnI的比色催化雙模式免疫層析試紙條制備方法，其特征在于，