[發明專利]靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途

在審

• 申請號: 202310163516.7
• 申請日: 2023-02-24
• 公開（公告）號: CN116376912A
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 何鑫;陳圣杰;尚東勝;劉晗青
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N5/10;A61K31/713;A61P35/00
• 代理公司: 南京智造力知識產權代理有限公司 32382
• 代理人: 陳佳佳

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途；本發明設計并合成了針對BUB1B基因的shRNA分子，并設計出構建shRNA的寡核苷酸序列，該分子與BUB1B基因的mRNA結合，高效地干擾其轉錄后翻譯，降低BUB1B基因在肺癌細胞中的表達，從而抑制肺癌細胞增殖和侵潤。對于抗腫瘤的治療具有十分重要的意義，將該shRNA分子進一步開發成為臨床治療藥物，在未來抗肺癌的靶向基因藥物研發中具有巨大的潛在價值，有望應用于制備高效、特異性強、副作用小的抗腫瘤藥物。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及一種靶向沉默BUB1B基因的shRNA及其用途。

背景技術

BUB1B(BUB1有絲分裂檢查點絲氨酸/蘇氨酸激酶B)，屬于紡錘體組裝檢查點(SAC)蛋白家族成員，能夠通過防止姐妹染色單體的過早分離來保持基因組穩定性，直到所有著絲粒在有絲分裂過程中正確附著到紡錘體上。它在SAC信號轉導和維持紡錘微管的穩定附著中起著重要作用。此外，BUB1B通過與其他SAC蛋白相互作用形成有絲分裂檢查點復合物，并抑制泛素連接酶促進復合物/環體(APC/C)的活性，從而抑制有絲分裂后期的開始，APC/C是一種進化上保守的泛素連合酶復合物，會調節細胞周期蛋白的降解，從而確保染色體的適當分離。鑒于BUB1B在有絲分裂檢查點信號傳遞和染色體聚合中的關鍵作用，BUB1B的異常表達或突變可能導致染色體非整倍體或不穩定，導致癌癥發病率增加。

RNA干擾技術(RNAi)是物種在進化上的一種高度保守的基因防御機制，即一種依賴于雙鏈RNA特異性短序列實現轉錄后的基因沉默的技術。目前實驗室常用的RNAi技術主要有小干擾RNA(siRNA)與短發夾RNA(shRNA)等。siRNA是短的雙鏈RNA，大小在19-29nt左右，3’端有兩個游離的堿基，可激活RNA的干擾，通過與目標mRNA互補序列結合，特異性地實現mRNA降解。但是，siRNA在細胞中的表達是瞬時的，發揮作用的時間比較短。相對于siRNA，shRNA可以通過病毒介導的轉染保持穩定，能夠減少脫靶效應。

調節BUB1B基因的表達有利于研究BUB1B基因在癌癥發病中的作用，但是目前沒有關于shRNA干擾BUB1B基因表達情況及作用研究的相關報道。

發明內容

本發明的目的在于解決現有技術中存在的一些問題，提供一種靶向性沉默BUB1B基因的shRNA、重組表達載體及其應用。本發明根據沉默BUB1B基因對肺癌細胞生長和侵潤的影響，判斷沉默BUB1B基因的shRNA序列的特異性，驗證可沉默BUB1B基因的shRNA序列對抗肺癌的作用。

為實現上述發明目的，本發明采取的技術方案如下：

本發明首先提供了一種shRNA，其能靶向沉默BUB1B基因表達，進一步的，所述shRNA包括shBUB1B-1或shBUB1B-2，用于沉默BUB1B基因的靶點序列；其中，所述shBUB1B-1的正反鏈分別為SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列，所述shBUB1B-2的正反鏈分別為SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列。

本發明還提供了一種包含上述的靶向沉默BUB1B基因表達的shRNA序列的慢病毒表達載體，所述載體為pLKO.1-TRC-shBUB1B-1或pLKO.1-TRC-shBUB1B-2。所述慢病毒表達載體由所述shBUB1B-1或shBUB1B-2分別克隆到慢病毒表達載體PLKO.1-TRC中獲得。

本發明還提供了包含所述的靶向沉默BUB1B基因表達的shRNA或包含所述的慢病毒表達載體的重組細胞。

本發明還提供所述的靶向沉默BUB1B基因表達的shRNA、或所述的慢病毒表達載體、或所述的重組細胞在制備抑制BUB1B基因表達的產品方面的應用。

本發明還提供所述的靶向沉默BUB1B基因表達的shRNA、或所述的慢病毒表達載體、或所述的重組細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用。