[發明專利]一種補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜的建立方法

在審

• 申請號: 202310094872.8
• 申請日: 2023-02-10
• 公開（公告）號: CN116297916A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 高維娟;賈玉倩;靳曉飛;張再康;李春花;郝瑩
• 申請（專利權）人: 河北中醫學院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/34;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京子焱知識產權代理事務所(普通合伙) 11932
• 代理人: 李娜

1.一種補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜的建立方法，采用高效液相色譜法，建立補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜，其特征在于，包括以下步驟：

S1、飲片選取：黃芪120g、當歸6g、赤芍4.5g、川芎3g、桃仁3g、紅花3g、地龍3g；

S2、補陽還五湯純化液的制備：

按處方量稱取上述7味飲片，加8倍量75％乙醇溶液，回流提取兩次，第一次提取2h，第二次提取1h，提取液合并，濾過，濃縮至無醇味，加水調節至240mL即每1mL藥液中含生藥量0.6g，即得濃縮液，備用；

大孔樹脂預處理：取HPD300型大孔樹脂至直徑20mm的層析柱中，加無水乙醇浸泡24h充分溶脹后，95％乙醇沖洗，至洗出液加5倍量蒸餾水時無白色渾濁，備用；

取上述濃縮液，以0.5mL·min^-1的流速加入到預處理好的HPD300型大孔樹脂層析柱中上樣，并用10倍樹脂量的85％乙醇溶液以0.5mL·min^-1的流速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至無醇味，加水調節藥液質量濃度約為0.5g·mL^-1即得補陽還五湯純化液；

S3、吸入液體制劑的制備：取步驟S2中補陽還五湯純化液，用1％氫氧化鈉溶液調節PH至8，加0.1％的無水亞硫酸鈉抗氧化劑和0.05％的苯甲醇抑菌劑，加水定容至285mL，過0.22μm微孔濾膜，灌裝，滅菌，即得；

S4、在高效液相色譜條件下，建立補陽還五湯吸入液體制劑圖譜，在230nm波長處有20個共有峰，指認出苦杏仁苷、羥基紅花黃色素A、芍藥苷、阿魏酸、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和刺芒柄花素。

2.根據權利要求1所述的補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于，步驟S2中，含生藥量為黃芪、當歸、川芎、赤芍、桃仁、紅花、地龍的總藥量。

3.根據權利要求1所述的補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述大孔樹脂為干樹脂。

4.根據權利要求1所述的補陽還五湯吸入液體制劑指紋圖譜的建立方法，其特征在于，所述高效液相色譜條件為：

色譜柱ThermoscientificHPLC?C₁₈(4.6×250mm?5μm)；

流動相為乙腈(A)-0.1％磷酸水(B)；

流速為1.0mL·min^-1；

梯度洗脫：0-10min，10％A；10-30min，10％-20％A；30-40min，20％-25％A；40-55min，25％-40％A；55-65min，40％A，柱溫30，℃進樣量10μL，檢測波長230nm。