[發明專利]檢測SARS-CoV-2的引物組、核酸組合產品和試劑盒

在審

• 申請號: 202310040264.9
• 申請日: 2023-01-13
• 公開（公告）號: CN116240314A
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 譚愛女;郭永超;王艷平;蔡錦剛;劉文騰
• 申請（專利權）人: 深圳聯合醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 王秉麗

本發明涉及一種檢測SARS?CoV?2的LAMP引物組、核酸組合產品和試劑盒。所述LAMP引物組包括靶向N基因的引物組和/或靶向Orf1ab基因的引物組；相對于傳統技術，本申請的有益效果包括：本申請針對所選任一靶基因中的6個區域設計的特異性引物，該特異性引物配合合適的環引物以及與擴增產物相匹配的特異性分子信標，在極限為5copies/T的靶標濃度下就能夠檢出，具有很好的高靈敏性。本申請基于RT?LAMP技術，進一步縮短實時熒光定量PCR的所需時間，能夠在25分鐘內出具檢測結果，檢測高效。

技術領域

本發明涉及分子檢測領域，尤其涉及一種檢測SARS-CoV-2的LAMP引物組、核酸組合產品和試劑盒。

背景技術

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)是一種RNA病毒，具有宿主范圍廣，傳播力強，變異率高等特點。

針對新型冠狀病毒檢測主要有抗原檢測法和核酸檢測法。

抗原檢測法檢測的是人體內是否存在病毒蛋白。抗原檢測試劑盒操作簡單，通常在15分鐘左右就可以顯示結果。缺點是由于不能放大病毒抗原，導致抗原檢測靈敏性較低，對于處于感染早期的新冠患者可能會出現假陰性的結果。

核酸檢測法主要為實時熒光PCR檢測，實時熒光PCR需要特定的引物、具有熒光團/猝滅劑雙標記探針以及具有5'→3'核酸外切酶活性Taq?DNA聚合酶，通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增SARS-CoV-2的保守片段，探針退火至內部特定序列。引物伸長后，Taq?DNA聚合酶置換并水解探針，從而釋放并激活熒光團。反應過程中觀察到的熒光增加可檢測SARS-CoV-2的存在，且熒光信號的增加與樣品中擴增產物的數量成正比，并由實時熒光PCR儀器檢測。實時熒光PCR檢測的準確性高，被視為新冠檢測的“金標準”，其缺點是需要專業人員使用昂貴的儀器進行檢測，同時檢測需要拭子采集、保存運輸、樣本處理、上機檢測等多個環節，耗時較長，且各環節的嚴格操作以及銜接，是保障核酸檢測結果的必要性因素。

傳統的核酸檢測法例如CN115058542A、CN115261511A、CN114807432A、CN114410848B、CN114369688B、CN114107574A、CN113881812B等。然而，傳統的核酸檢測法靈敏度有待提升。

有鑒于此，特提出本申請。

發明內容

本申請實施例的主要目的包括提供一組檢測SARS-CoV-2的LAMP引物組，其能夠和合適的分子信標搭配，實現SARS-CoV-2的高靈敏度檢測。

在本申請的第一方面，提供一種檢測SARS-CoV-2的LAMP引物組，所述LAMP引物組包括靶向N基因的引物組和/或靶向Orf1ab基因的引物組；

所述靶向N基因的引物組包括如SEQ?ID?No.1所示的上游外部引物F3、如SEQ?IDNo.2所示的下游外部引物B3、如SEQ?ID?No.3所示的上游內部引物FIP、如SEQ?ID?No.4所示的下游內部引物BIP；

所述靶向Orf1ab基因的引物組包括如SEQ?ID?No.8所示的上游外部引物F3、如SEQIDNo.9所示的下游外部引物B3、如SEQ?ID?No.10所示的上游內部引物FIP、如SEQ?ID?No.11所示的下游內部引物BIP。

在其中一些實施例中，所述LAMP引物組滿足如下條件中的一個或者多個：

(1)所述靶向N基因的引物組還包括如SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示的環引物；和，

(2)所述靶向Orf1ab基因的引物組還包括如SEQ?ID?No.12和SEQ?ID?No.13所示的環引物。

在其中一些實施例中，所述LAMP引物組還包括的靶向內參基因的引物組。