[發明專利]一種大體積培養的CAR NK細胞的收獲方法

在審

• 申請號: 202211736897.5
• 申請日: 2022-12-31
• 公開（公告）號: CN116144591A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 李華順;夏穎;劉剛
• 申請（專利權）人: 四川阿思科力生物科技有限公司;蘇州因特藥物研發有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N13/00;A01N1/02
• 代理公司: 北京布瑞知識產權代理有限公司 11505
• 代理人: 潘穎

本申請涉及免疫細胞治療技術領域，具體涉及一種大體積培養的CAR?NK細胞的收獲方法。收獲方法包括：將大體積培養的CAR?NK細胞培養物進行連續流離心，得到濃縮后的細胞；連續流離心的離心力為700～900g，轉速為200～280rpm；將濃縮后的細胞置換于新鮮培養基中，進行輻照處理，得到輻照后的細胞。本申請方法能夠達到細胞治療產品生產制備階段全自動和全封閉的要求，且單批次生產規模較大，病人使用的成本顯著降低，并且不同批次間差異小，產品質量更可控。

技術領域

本申請涉及免疫細胞治療技術領域，具體涉及一種大體積培養的CAR?NK細胞的收獲方法。

背景技術

傳統的腫瘤治療方式主要包括手術、放化療以及以小分子抑制劑和治療性抗體為代表的靶向治療策略。相比于化療以及放療，靶向治療由于毒副作用小，生物相容性高，對于某些類型的腫瘤具有積極的治療結果，逐漸成為目前腫瘤治療的主流技術手段。但是，靶向治療還存在很多缺點，一方面同一種藥物不一定對同一類型的癌癥患者均有效，需要進一步挖掘和分析患者的亞群分類信息以及基因型的分型情況，同時靶向治療還存在多次給藥后腫瘤耐藥和癌癥復發轉移的問題。

近年來大量科學研究和臨床實踐表明，機體免疫系統在預防和抑制惡性腫瘤的發生和發展過程中具有重要作用。通過增強機體免疫系統的功能來進行腫瘤的預防和治療，是腫瘤治療領域最熱門的治療手段。腫瘤免疫治療主要是通過系統性地激發和增強患者免疫系統的功能從而實現對腫瘤細胞的殺傷和清除作用。大量的臨床實踐表明，腫瘤免疫治療比手術、化療、放療以及靶向治療等傳統的腫瘤治療方式具有更顯著的治療效果，同時具有安全性更高，毒副作用更低的特點。

自然殺傷細胞(Nature?killer?cell,NK)源于骨髓中的造血前體細胞，廣泛分布于不同的組織，如外周血，脾臟，肺，肝臟等。正常人外周血中NK細胞占淋巴細胞的5％～10％，在臍血中占免疫細胞的10％～20％。大量的科學研究已經證實了NK細胞在癌癥免疫中的作用及治療潛力，同時許多證據也揭示了實體瘤及血液惡性腫瘤的發生與NK細胞的功能受損有關。

當NK細胞被激活后，即可在趨化因子的作用擴散并浸潤至感染部位和腫瘤病灶，發揮對惡性轉化細胞的殺傷作用。同時，激活后的NK細胞還能夠分泌多種細胞因子和趨化因子，如IFN-γ、TNF-α、GM-CSF、IMP-3、CCL5等，這些細胞因子和趨化因子能夠招募并活化樹突狀細胞、單核-巨噬細胞等免疫呈遞細胞，引導NK細胞與內皮細胞或其他免疫細胞相互作用，發揮連接天然免疫和適應性免疫的橋梁作用。基于NK細胞的腫瘤免疫治療手段是目前除T細胞外另一種重要的腫瘤治療策略。與T細胞治療方法相比，NK細胞對腫瘤細胞的殺傷和清除無“MHC限制性”，不會發生嚴重的“細胞因子風暴”，無移植物抗宿主病(GVHD)的反應，是最有前景開發成可規模化生產制備的“貨架型”腫瘤免疫細胞治療產品的細胞類型。與CAR?T細胞類似，通過對NK細胞進行嵌合抗原受體修飾，能夠發揮NK細胞靶向識別和殺傷表達特定腫瘤抗原的腫瘤細胞，同時發揮免疫調節的作用。

隨著過繼性CAR?NK細胞療法在腫瘤治療中得到重視，CAR?NK細胞產品的下游收獲和制備工藝也越來越受到人們的關注。目前，CAR?NK細胞產品下游制備方法主要還采用與CAR?T細胞產品類似的技術路線，絕大部分還停留在“手動”加“敞口”操作的方式，生產制備過程操作復雜，過度依賴人工操作，產品質量不穩定性較高，批次間差異大。其次，因為CART到目前為止還是一種“個體化”的細胞治療產品，細胞培養規模小，培養體積大概僅1-2L左右，一個病人僅制備1-2袋細胞(One?Batch-一批次)，不能滿足CAR?NK細胞治療產品同種異體的臨床使用需求，限制了腫瘤免疫細胞療法在生物醫學領域的大規模推廣和臨床應用。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種大體積培養的CAR?NK細胞的收獲方法。該方法能夠達到細胞治療產品生產制備階段全自動和全封閉的要求，單批次生產規模較大，病人使用的成本顯著降低，并且不同批次間差異小，產品質量更可控。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：