[發(fā)明專利]辣椒細胞質(zhì)雄性不育育性恢復分子標記、分型引物及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211735954.8
• 申請日: 2022-12-30
• 公開（公告）號: CN116200525A
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉峰;戴雄澤;馬艷青;楊慧萍;湯冰倩;熊程;胡博文;鄒學校
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 長沙朕揚知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43213
• 代理人: 苗雅娟

1.一種辣椒細胞質(zhì)雄性不育育性恢復分子標記，其特征在于，所述分子標記為辣椒基因組上的一段核苷酸序列，該分子標記與辣椒細胞質(zhì)雄性不育育性恢復形狀顯著相關(guān)，該核苷酸序列以辣椒基因組為參考基因，其包含位于第6號染色體246736279-248221876bp區(qū)間上的一段堿基序列，為6號染色體上的247327150位置處發(fā)生C向T的突變。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的辣椒細胞質(zhì)雄性不育育性恢復分子標記，其特征在于，所述分子標記通過EMS誘變后篩選到的表型穩(wěn)定的雄性不育突變體材料獲得。

3.一種用于鑒定、篩選或應(yīng)用根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分子標記的KASP分型引物，其特征在于，所述KASP分型引物的引物序列為：

正向引物6X：CAACAGTGGGGCAACCAATAC；

正向引物6Y：CAACAGTGGGGCAACCAATAT；

反向引物6C：GTTTGAGTTGGAGGCCATTT。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的KASP分型引物，其特征在于，正向引物6X和6Y分別連接不同的熒光接頭序列，所述熒光接頭序列選擇FAM、HEX、FITC、RED、TET、JOE、R110中的一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的KASP分型引物，其特征在于，正向引物6X和6Y所連接的熒光接頭序列為FAM和HEX，序列如下：

正向引物PEPER-CMS-6X：

GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCAACAGTGGGGCAACCAATAC；

正向引物PEPER-CMS-6Y：

GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCAACAGTGGGGCAACCAATAT。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分子標記或權(quán)利要求3-5任一所述的KASP分型引物的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括鑒定和輔助篩選辣椒育性，或辣椒細胞質(zhì)雄性不育突變體鑒定、篩選或者育種。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的的應(yīng)用，其特征在于，通過PCR檢測進行鑒定或篩選，具體為以待測樣品基因組DNA為模板，利用分子標記的擴增引物進行擴增，然后對擴增引物進行熒光檢測，其中擴增體系為：模板DNA?50-100ng，引物分別為0.15ul，2X?PARMS?master?mix5ul，ddH₂O補至10ul。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分子標記的應(yīng)用，其特征在于，對擴增產(chǎn)物進行熒光檢測時，檢測到引物PEPER-CMS-6X對應(yīng)的熒光信號時，則檢測位點為C:C基因型，判定為辣椒花粉可育表型的單株；檢測到引物PEPER-CMS-6Y對應(yīng)的熒光信號時，則檢測位點為T:T基因型，判定為辣椒花粉不育表型的單株；若同時檢測到兩種熒光信號時，則檢測位點為T:C基因型，判定為辣椒花粉可育表型的單株。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的分子標記的應(yīng)用，其特征在于，采用Touchdown?PCR；Touchdown?PCR擴增程序為：94℃15min；95℃20s；65℃-56℃60s，10個循環(huán)，每個循環(huán)退火延伸溫度降0.8℃；94℃20s；57℃60s，30個循環(huán)。