[發明專利]一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法

在審

• 申請號: 202211722969.0
• 申請日: 2022-12-30
• 公開（公告）號: CN116286412A
• 公開（公告）日: 2023-06-23
• 發明（設計）人: 張志榕;高華清;黃明星;周學強;戴權;彭成洲
• 申請（專利權）人: 北京金泰毅農作物科技有限公司;江西紅土地化工有限公司;毅植農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12N1/20;C12N15/01;C12N13/00;C12R1/645
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 褚明偉

1.一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，具體步驟如下：

S1、紅法夫酵母培養：將處理后的紅法夫酵母菌液稀釋之后涂布至固體培養基上，避光培養；

S2、加入指示菌：配置MRS瓊脂培養基，降溫后接種乳酸菌，加入乳酸菌抑制劑，混勻后覆蓋于步驟S1中生長有紅法夫酵母的固體培養基上，靜置培養；

S3、篩選目標菌：觀察步驟S2中固體培養基的情況，從該固體培養基中篩選乳酸菌生長面積最大的菌落，挑取其下方的紅法夫酵母，傳代純化后使用高效液相色譜法測定所篩選紅法夫酵母的蝦青素含量。

2.根據權利要求1所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，步驟S1中，所述紅法夫酵母菌液的具體處理步驟為：(1)菌種活化：將保存于凍存管的紅法夫酵母接種到錐形瓶中進行復壯，振蕩培養得到復壯后的紅法夫酵母菌液；

(2)紫外誘變：將步驟S1中復壯得到的紅法夫酵母菌液用生理鹽水稀釋，吸取稀釋后的紅法夫酵母菌液置于無菌培養皿內，開蓋，放入轉子，將培養皿置于磁力攪拌器上，在避光的環境下，開啟紫外燈照射進行誘變，得到照射后的紅法夫酵母菌液。

3.根據權利要求2所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述錐形瓶中培養基的配方為：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，葡萄糖20g/L，

所述錐形瓶容量為500mL，裝液量為100ml，

所述振蕩培養溫度為22-24℃，轉速為200rpm，時間為48～50小時；

步驟(2)中，所述紅法夫酵母菌液稀釋至OD₆₆₀＝0.3-0.4，

所述磁力攪拌器轉速設置為300rpm，

所述紫外燈波長為253.7nm，

所述培養皿與紫外燈之間距離為20-30cm，

所述紫外燈照射時間為50-70s。

4.根據權利要求1所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，所述篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法具體步驟如下：

S1、紅法夫酵母培養：以紅光燈作為光源，采用逐級梯度稀釋法，將處理后的紅法夫酵母菌液稀釋，吸取100μL稀釋后的菌液涂布至固體培養基上，用牛皮紙包裹后，避光培養；

S2、加入指示菌：配置MRS瓊脂培養基，降溫至50℃后接種乳酸菌，加入乳酸菌抑制劑，混勻后吸取7-8ml覆蓋于步驟S1中生長有紅法夫酵母的固體培養基上，靜置培養；

S3、篩選目標菌：觀察步驟S2中固體培養基的情況，從該固體培養基中篩選乳酸菌生長面積最大的菌落，挑取其下方的紅法夫酵母，在YPD固體培養基上純化2-3代后，即為篩選所得目標菌株，使用高效液相色譜法測定紅法夫酵母的蝦青素含量。

5.根據權利要求4所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，步驟S1中，所述處理后的紅法夫酵母菌液稀釋至1000～10000倍；

所述固體培養基配方為：蛋白胨8-10g/L，酵母粉4-5g/L，葡萄糖16-20g/L，瓊脂14-16g/L；

所述避光培養溫度為22-24℃，時間為6-8d。

6.根據權利要求5所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，向固體培養基中添加蝦青素產生抑制劑。

7.根據權利要求6所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，所述蝦青素產生抑制劑為β-紫蘿酮，

所述β-紫蘿酮添加量為400-450mg/L，

添加方式為先將β-紫蘿酮溶解于等量的無水乙醇中，再添加到固體培養基中。

8.根據權利要求4所述的一種篩選高蝦青素產量的紅法夫酵母的方法，其特征在于，步驟S2中，所述乳酸菌選自乳球菌屬、片球菌屬、腸球菌屬、雙歧桿菌屬中的一種；

所述乳酸菌抑制劑為過氧化氫和次氯酸鈉1：1配置；

所述乳酸菌抑制劑接種濃度為5-7％；

所述靜置培養溫度為37℃，時間為24-48h。