[發明專利]包蟲病檢測引物、探針、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 202211713891.6
• 申請日: 2022-12-29
• 公開（公告）號: CN115961057B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發明（設計）人: 孫曉明;高姍姍;經珍珠;王新杰;張阿敏;張棕瑤
• 申請（專利權）人: 北京億森寶生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 李正

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，尤其涉及一種包蟲病檢測引物、探針、試劑盒及應用。所述包蟲病檢測引物包括上游引物Hy?F和下游引物Hy?R；所述上游引物Hy?F和下游引物Hy?R是根據細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、伏氏棘球絳蟲和少節棘球絳蟲的rrnS基因序列設計得到。將所述檢測引物應用于包蟲病的熒光定量PCR檢測，能夠靈敏地檢測包蟲病，且準確性、特異性和敏感性高，穩定性好，檢測結果快速、有效。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域，尤其涉及一種包蟲病檢測引物、探針、試劑盒及應用。

背景技術

包蟲病(Hydatidosis)又稱棘球蚴病(Echinococcosis)。該病不僅是傳播最廣泛的寄生蟲病之一，也是公共衛生方面治療和預防費用最高的疾病之一，呈地方性流行，是由棘球屬的絳蟲的幼蟲寄生于人或動物機體組織所引發的傳染病。包蟲病的早期臨床表現無自覺癥狀，全身健康狀況良好，病程進展緩慢，潛伏期1-30年。在分類學上可以分為四個蟲種:細粒棘球絳蟲(Echinococcus?granulosus，Eg)、多房棘球絳蟲(Echinococcusmultilocularis，Em)、伏氏棘球絳蟲(Echinococcus?vogeli，Ev)和少節棘球絳蟲(Echinococcus?oligarthrus，Eo)。這四種棘球屬絳蟲可引起不同類型的包蟲病。包蟲病有“蟲癌”之稱。該病直接導致器官或屠體死亡，間接影響人和動物的健康。采取早期診斷、早期治療以及積極防治動物傳染源的綜合性防治措施，對控制包蟲病對人類健康和畜牧業發展的影響十分重要。

包蟲病的診斷目前主要依靠于B超、影像學檢查和病理學檢查等。因方法自身限制，易造成小病灶、非典型病灶的誤診和漏診。因此，有必要建立一種快速、靈敏、準確度高的包蟲檢測方法。隨著分子生物學技術的發展，近年來出現了一系列檢測包蟲病的新方法，如多重PCR檢測法、糞抗原ELISA法、糞DNA檢測方法等。目前這些檢測方法，均是針對細粒棘球絳蟲或者多房棘球絳蟲單獨設計的引物和探針，增加了檢測成本；多重PCR因其在一個反應體系中加入了二對以上的引物，容易與親緣關系較近的病原發生交叉反應，并且引物對之間也易發生互補結合、易產生干擾反應現象，因此，存在特異性差問題。ELISA方法相對簡便、快速，但對于微量或雜質較多的樣品，其特異性和靈敏度較低。

目前在包蟲病檢測方面已開發了多種PCR檢測方法，Trachsel,D.等開發了一種多重PCR來區分多房棘球絳蟲、細粒棘球絳蟲和帶絳蟲的感染；Shang等開發了多重PCR檢測方法，用于3種棘球絳蟲的特異性和敏感性檢測。目前尚未發現能在一個反應管條件下，同時針對細粒棘球絳蟲、多房棘球絳蟲、伏氏棘球絳蟲和少節棘球絳蟲四個致病蟲種，進行有效檢測的技術方案。

發明內容

有鑒于背景技術中存在的技術問題，本發明的一個目的在于提供一種能同時用于檢測和鑒定4種包蟲病病原的產品，能夠快速、有效地進行檢測，準確性、特異性和敏感性高，穩定性好。

為了實現上述目的，本發明提供了一種包蟲病檢測引物，包括上游引物Hy-F和下游引物Hy-R；

所述上游引物Hy-F的核苷酸序列包括SEQ?ID?No.1，或，SEQ?IDNO.1所示的核苷酸序列經過一個或多個核苷酸的替換、缺失或插入獲得的具有相同功能的編碼核苷酸序列；或，在嚴格條件下可以與SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列進行雜交的核苷酸序列；

所述下游引物Hy-R的核苷酸序列包括SEQ?ID?No.2，或，SEQ?IDNO.2所示的核苷酸序列經過一個或多個核苷酸的替換、缺失或插入獲得的具有相同功能的編碼核苷酸序列；或，在嚴格條件下可以與SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列進行雜交的核苷酸序列。

本發明還提供了與所述引物配套使用的探針，包括探針Hy-P；所述探針Hy-P的核苷酸序列包括SEQ?ID?No.3，或，SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列經過一個或多個核苷酸的替換、缺失或插入獲得的具有相同功能的編碼核苷酸序列；或，在嚴格條件下可以與SEQIDNO.3所示的核苷酸序列進行雜交的核苷酸序列。