[發明專利]人乳頭瘤病毒HPV35 L1蛋白的表達和類病毒樣顆粒及其制備方法

有效

• 申請號: 202211702926.6
• 申請日: 2022-12-28
• 公開（公告）號: CN116102627B
• 公開（公告）日: 2023-10-24
• 發明（設計）人: 伍樹明;劉永江;陳曉;高文雙;王學紅;張海江;沈邇萃;薛俊蓮;張堯;陳丹;銀飛;王建英
• 申請（專利權）人: 北京康樂衛士生物技術股份有限公司
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;C12N15/37;C12N15/70;C12N1/21;C07K1/22;C07K1/18;C12R1/19
• 代理公司: 北京知文通達知識產權代理事務所(普通合伙) 16051
• 代理人: 歐陽石文

1.一種截短的HPV35型L1蛋白，其是在野生型HPV35型L1蛋白的基礎上，在其N端截短不多于10個氨基酸，優選4個氨基酸，且在其C端截短不多于30個氨基酸，優選28個氨基酸；優選地，截短的HPV35型L1蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.編碼如權利要求1所述的截短的HPV35型L1蛋白的核酸；優選地，其經過密碼子優化的核酸；更優選地，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

3.含有SD序列和編碼如權利要求2所述的核酸，優選地，所述SD序列的核苷酸序列為5`-AGGAGGAATTA-3`。

4.含有如權利要求2或3所述的編碼核酸的表達盒或表達載體。

5.如權利要求4所述的表達盒或表達載體，其特征在于，其是原核表達載體，更優選地是在載體pGEX基礎上去除了GST標簽序列，并且整合所述SD序列的截短的HPV35型L1蛋白的核酸分子而得到。

6.含有如權利要求2或3所述的編碼核酸的表達盒或表達載體的重組宿主細胞。

7.如權利要求6所述的重組宿主細胞，其特征在于，其是原核細胞，優選為大腸桿菌。

8.一種表達如權利要求1截短的HPV35型L1蛋白的方法，其特征在于，培養如權利要求6或7所述的重組宿主細胞以產生HPV35型L1蛋白，任選地，包括純化步驟，優選地所述純化步驟為：取所述的重組宿主細胞的菌體用破菌緩沖液充分重懸，然后用高壓均質機對菌體進行高壓破碎，離心收集上清；上清進一步通過硫酸銨沉淀，硫酸銨的最終飽和度為30%，沉淀復溶后再次離心收集上清獲得粗純液；

粗純液先上樣進行Superdex200分子篩層析，根據L1目的蛋白的出峰位置收集其所在組分；

接著將分子篩收集樣品上樣進行Source15Q陰離子交換層析，通過NaCl線性洗脫收集L1目的蛋白所在組分，得到HPV35型L1蛋白。

9.一種表達如權利要求1截短的HPV35型L1蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟：根據如權利要求8所述的方法得到的HPV35型L1蛋白的步驟，調節其所在緩沖液的pH和鹽濃度，使其自組裝形成VLP。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述緩沖液包括但不限于Tris緩沖液，磷酸鹽緩沖液，醋酸緩沖液，HEPES緩沖液，MOPS緩沖液，枸櫞酸緩沖液、組氨酸緩沖液，硼酸緩沖液，優選磷酸鹽緩沖液；

緩沖液的PH在4.75-5.25，鹽濃度在2.0-4.0M之間，優選PH4.75，PH5.0，PH5.25；其中的鹽濃度在2.0-4.0M之間，優選2.0M，2.5M，3.0M，3.5M，4.0M；

任選地，還包括純化所得HPV35L1五聚體的步驟。