[發明專利]一種產糠胺的基因工程菌及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202211645773.6
• 申請日: 2022-12-20
• 公開（公告）號: CN115786226A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 咸漠;劉耀杰;徐超
• 申請（專利權）人: 中國科學院青島生物能源與過程研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/70;C12N15/54;C12N15/53;C12P17/04;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

1.一種產糠胺的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌過表達轉氨酶基因OATA和丙氨酸脫氫酶基因ALD。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌被敲除DNA結合轉錄雙調節因子arcA，并過表達轉氨酶基因OATA、丙氨酸脫氫酶基因ALD和T7啟動子連接碳存儲調節因子CsrB基因。

3.根據權利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述轉氨酶基因OATA，來源于人蒼白桿菌，基因序列如SEQ ID NO.3所示；所述丙氨酸脫氫酶基因ALD，來源于來源于谷草芽孢桿菌，Genebank ID：936557；csrB基因序列如SEQ ID NO.1所示；DNA結合轉錄雙調節因子arcA的基因序列如SEQ ID NO.4所示；T7啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.根據權利要求1-3任一項所述的基因工程菌的出發菌株為大腸桿菌E.coliBL21(DE3)。

5.含有權利要求1-3任一項所述的基因工程菌的微生物制劑。

6.權利要求1-3任一項所述的基因工程菌的制備方法，其特征在于，所述制備方法的具體步驟如下：

步驟1：敲除大腸桿菌E.coli BL21(DE3)基因組上的全局調控因子arcA，獲得突變菌株I；將T7啟動子的序列插入到出發菌株的碳存儲調節因子CsrB基因序列前，獲得突變菌株II，并制備感受態細胞；

步驟2：制備含有轉氨酶基因OATA、丙氨酸脫氫酶基因ALD的重組質粒，并將重組質粒導入感受態細胞中，獲得重組大腸桿菌。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，步驟1具體步驟為以T7啟動子的核苷酸序列為搭橋序列，克隆獲得T7-csrB同源臂；將T7-csrB同源臂連接至自殺質粒pRE112，獲得重組質粒pRE112-T7-csrB；利用重組質粒pRE112-T7-csrB介導的同源重組法在突變菌株I的碳存儲調節因子csrB基因序列前插入T7啟動子的核苷酸序列，獲得突變菌株II，命名為E.coli BL21(DE3)△arcA T7-csrB。

8.一種全細胞催化制備糠胺的方法，其特征在于，利用權利要求1-3任一項所述的基因工程菌在含有糠醛的發酵培養體系中發酵，發酵的溫度為37℃，至少12小時。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，發酵培養體系的成分包括氨基供體、葡萄糖和呋喃-2-甲醛。

10.權利要求1-3任一項所述的基因工程菌在合成糠胺和提高糠胺產量中的應用。