[發明專利]一種表達貓細小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗及其制備方法

在審

• 申請號: 202211617581.4
• 申請日: 2022-12-13
• 公開（公告）號: CN116218889A
• 公開（公告）日: 2023-06-06
• 發明（設計）人: 楊永樂;黃耀偉;唐建斌
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;A61K39/23;A61P31/20;C12N15/35
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種表達貓細小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗及其制備方法，涉及核酸疫苗領域。本發明成功制備了一種表達貓細小病毒蛋白的mRNA疫苗，構建包含貓細小病毒VP2蛋白的mRNA載體質粒，并用于制備加帽修飾的mRNA，結合脂質體包裹方案制備mRNA疫苗，并應用于貓泛白細胞減少癥的預防。該方法在貓泛白細胞減少癥研究和疫苗創制上具有應用價值，能夠大力推進疫苗的轉化應用。

技術領域

本發明涉及核酸疫苗領域，具體而言涉及一種表達貓細小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗，包含貓細小病毒VP2蛋白mRNA疫苗的制備。

背景技術

貓泛白細胞減少癥(feline?panleukopenia，FP)是由貓細小病毒(Felineparvovirus，FPV)引起的貓的一種急性、高度接觸性傳染病。FPV感染的典型臨床癥狀是雙相熱、嘔吐、腹瀉、脫水，循環障礙及白細胞嚴重減少和出血性腸炎。主要感染1歲以內的幼貓，通常情況下，對1歲以下的貓的致死率為50％～60％，對5月齡以下的幼貓的死亡率高達80％～90％。如果母貓在懷孕期感染該病毒，則造成死胎、流產等癥狀。最初于20世紀90年代由Verge首次鑒定出該病毒，之后在加拿大、美國、日本等許多國家都有發現，我國在1985年首次分離到該病毒，之后張振興和李剛等人報道在河北、河南、浙江等地均有貓細小病例的發生。該病在世界上廣泛存在，被認為是貓重要的傳染病之一。FPV宿主廣泛，除感染家貓外，還能感染其他貓科動物(如虎、豹)、鼬科動物(如貂)及熊科(如浣熊)嚴重危害寵物貓及野生貓科動物的生命健康。FPV屬于細小病毒科(Parvoviridae)，細小病毒屬(Parvovirus)，是一種能夠自我復制的無囊膜的單股正鏈DNA病毒。FPV病毒粒子約為20-30nm，呈等軸對稱的正二十面體。FPV基因組長約5Kb，包括一個長的編碼區域和兩端由獨特的回文結構組成，回文序列堿基配對形成發卡雙鏈體，編碼區主要編碼兩個主要的開放閱讀框，分別編碼非結構蛋白NS(NS1和NS2)和病毒結構蛋白VP(VP1和VP2)。

VP2蛋白約占所有結構蛋白的90％，VP1蛋白占所有結構蛋白的10％，因此VP2蛋白是FPV編碼的主要的抗原蛋白，在免疫應答、識別受體及感染組織的過程中發揮著重要作用。VP2蛋白的三級結構主要由Loop1-Loop5這5個環形結構圍繞8個反向平行的反折疊片構成的三折疊單元纖突、肩部和頂部形成的，與病毒的血凝特性和致病性密切相關。其中Loop3是組成病毒三折疊蛋白單元纖突的肩部，不直接參與病毒衣殼蛋白對轉鐵蛋白受體的識別，而是在立體空間上對提高病毒的感染效率。VP2蛋白上有多個抗原識別位點，能夠刺激機體產生中和抗體，起到免疫保護作用。由VP2蛋白組成的病毒樣顆粒可以用于制備多種病毒的候選疫苗，對該病毒的復制及感染宿主的范圍具有一定的決定作用，并且能夠很好的誘導體液和細胞免疫。

相比傳統疫苗，mRNA疫苗作為新型疫苗的形式，具有生產工藝簡單、開發速度快、無需細胞培養、成本低。相較與DNA疫苗，mRNA疫苗無需進入細胞核，沒有整合至宿主基因組的風險，半衰期可以通過修飾進行調整。mRNA疫苗可提供對適應性和先天免疫力的綜合刺激，即原位抗原表達和危險信號傳遞；可以誘導“平衡”免疫反應，包括體液和細胞效應因子以及免疫記憶。

發明內容

本發明針對現有寵物疫苗產品中存在的不足，提供了一種預防或治療貓泛白細胞減少癥的表達貓細小病毒VP2蛋白的mRNA疫苗制備方法及其應用。

本發明的技術方案：

一種重組mRNA合成質粒，包括質粒骨架序列、編碼貓細小病毒VP2蛋白的基因；所述編碼貓細小病毒VP2蛋白的基因序列如SEQ?ID?NO.1所示。

其中，貓細小病毒(Feline?panleukopenia?virus，FPV)屬于細小病毒科病毒(Panleukopenia)，主要感染1歲以內的幼貓，引起雙相熱、嘔吐、腹瀉、脫水，循環障礙及白細胞嚴重減少和出血性腸炎。