[發(fā)明專利]一種低氧誘導(dǎo)分泌乳酸氧化酶的大腸桿菌工程菌及其應(yīng)用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202211616701.9 | 申請日： | 2022-12-15 |
| 公開（公告）號： | CN116254213A | 公開（公告）日： | 2023-06-13 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 傅譯可;李飛雨;李翔 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江大學(xué)杭州國際科創(chuàng)中心 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/53;C12N15/113;C12N15/70;A61K38/44;A61P35/00;A61P43/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈金龍 |
| 地址： | 311200 浙江省杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 低氧 誘導(dǎo) 分泌 乳酸 氧化酶 大腸桿菌 工程 及其 應(yīng)用 | ||
1.一種低氧誘導(dǎo)分泌乳酸氧化酶的大腸桿菌工程菌，其特征在于，將載有低氧誘導(dǎo)啟動子、分泌肽基因和乳酸氧化酶基因的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌內(nèi)得到所述大腸桿菌工程菌，所述低氧誘導(dǎo)啟動子在低氧條件下被激活，啟動乳酸氧化酶基因的表達，并由分泌肽基因編碼的蛋白介導(dǎo)乳酸氧化酶轉(zhuǎn)運至胞外間質(zhì)。
2.如權(quán)利要求1所述的大腸桿菌工程菌，其特征在于，所述低氧誘導(dǎo)啟動子為來源于豬霍亂沙門菌(Salmonella?Choleraesuis)C500的厭氧誘導(dǎo)啟動子PSnirB，分泌肽基因為來源于果膠桿菌(Pectobacterium?carotovorum)的分泌肽基因pelB，乳酸氧化酶基因為來源于海豚鏈球菌(Streptococcus?iniae)的乳酸氧化酶基因lcto。
3.如權(quán)利要求2所述的大腸桿菌工程菌，其特征在于，所述低氧誘導(dǎo)啟動子的序列如SEQ?ID?NO.1所示，分泌肽基因序列如SEQ?ID?NO.3所示，乳酸氧化酶基因序列如SEQ?IDNO.2所示。
4.如權(quán)利要求1～3任一所述的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)構(gòu)建含有低氧誘導(dǎo)啟動子序列、分泌肽基因序列和乳酸氧化酶基因序列的原核表達質(zhì)粒；
(2)將含有低氧誘導(dǎo)啟動子序列、分泌肽基因序列和乳酸氧化酶基因序列的原核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中，得到所述大腸桿菌工程菌。
5.如權(quán)利要求4所述的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述轉(zhuǎn)化的方式為熱激法。
6.如權(quán)利要求4所述的大腸桿菌工程菌的構(gòu)建方法，其特征在于，所述原核表達質(zhì)粒為pET-20b(+)質(zhì)粒。
7.如權(quán)利要求1～3任一所述的大腸桿菌工程菌在制備用于治療具有低氧氣特性的腫瘤或壞疽的藥物中的應(yīng)用。
8.一種藥物，其特征在于，活性成分含有權(quán)利要求1～3任一所述的大腸桿菌工程菌。
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