[發明專利]一種用于海水魚類肌肉干細胞快速分化的分化誘導培養基

在審

• 申請號: 202211615748.3
• 申請日: 2022-12-15
• 公開（公告）號: CN115820549A
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發明（設計）人: 郭華榮;薛霆
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077
• 代理公司: 北京識然知識產權代理事務所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種海水魚類肌肉干細胞的分化誘導培養基，該分化培養基是在L?15基礎培養基中添加2％間充質干細胞專用胎牛血清、1％雙抗溶液和三種分化誘導因子而配制而成。所述的三種分化誘導因子為維生素C、維生素D和胰島素。另一方面，本發明還提供了前述的用于誘導海水魚類肌肉干細胞快速分化的分化誘導培養基的使用方法。利用本發明所提供的分化誘導培養基可以快速有效地誘導體外培養海水魚類肌肉干細胞發生分化，能夠在1?3天內誘導海洋魚類肌肉干細胞分化產生更長更粗的肌纖維，表達更多的纖維狀肌動蛋白。

技術領域

本發明屬于干細胞和動物細胞培養肉技術領域，具體涉及一種用于誘導海水魚類肌肉干細胞快速分化的分化培養基及其使用方法。

背景技術

近年來，由于肉制品消耗快速增長，加重了傳統畜牧業和水產養殖業的負擔，同時養殖業的快速發展也帶來了環境污染問題。而細胞培養肉(cell culture meat)，又稱為培育肉(lab-grown meat)、試管肉或無屠宰肉，因其來源可追溯、綠色安全、口感更接近傳統肉類等特性引起了廣泛的社會關注，成為一種非常有應用前景的未來食品。而且，隨著人口增長，人均魚肉消費量增加，世界范圍內的魚肉消費量也在增加。但世界各地的過度捕撈對生態系統造成了巨大的破壞。因此迫切需要確保可持續的漁業資源，以滿足對魚類日益增長的需求。細胞培養魚肉的成功研發，可為漁業資源的可持續發展，滿足日益增長的魚肉需求提供一條新的技術途徑。

由于肌肉干細胞的存在，肌肉具有顯著的再生能力，在肌肉受到損傷時，肌肉干細胞可被激活，并分化形成增殖性成肌細胞，產生新的肌纖維，最終完成肌肉的再生過程。因為這一特性，肌肉干細胞被廣泛選為細胞培養肉種子細胞的首選來源。目前，誘導體外培養肌肉干細胞分化的常用的分化培養基配方是在DMEM基礎培養基中加入2％馬血清和1％雙抗。研究表明，該分化培養基非常適用于哺乳動物肌肉干細胞的體外分化誘導，但是并不適用于魚類肌肉干細胞的體外分化誘導。

因此，亟需研發一種可用于誘導魚類肌肉干細胞快速分化的分化誘導培養基，這對于細胞培養魚肉的發展是非常必要的。

發明內容

本發明的目的是提供一種海水魚類肌肉干細胞的分化誘導培養基，以用于快速有效地誘導體外培養海水魚類肌肉干細胞的分化。

本發明首先提供一種用于海水魚類肌肉干細胞體外分化的分化誘導培養基，該分化培養基是添加有2％間充質干細胞專用胎牛血清、維生素C、維生素D和胰島素的L-15基礎培養基。

進一步的，所述海水魚類肌肉干細胞分化誘導培養基中，維生素C濃度為100-400μmol/L。

進一步的，所述海水魚類肌肉干細胞分化誘導培養基中，維生素D濃度為50-300nmol/L。

進一步的，所述海水魚類肌肉干細胞分化誘導培養基中，胰島素濃度為0.1-10μg/mL。

進一步的，所述的分化誘導培養基中還添加有抗生素，作為實施例的一種具體記載，是添加1.0×10⁵IU/L青霉素鈉和100mg/L鏈霉素。

作為實施例的一種具體記載，所述的分化誘導培養基，是添加有終濃度為2％間充質干細胞專用胎牛血清、終濃度為200μmol/L的維生素C、終濃度為100nmol/L的維生素D和終濃度為10μg/mL的胰島素的L-15基礎培養基。

進一步的，所述分化誘導培養基能夠快速有效地誘導海水魚類肌肉干細胞的分化。具體的，能夠誘導海水魚類肌肉干細胞在1-3天內完成體外分化過程。

進一步的，所述分化誘導培養基能夠促進海水魚類肌肉干細胞中纖維狀肌動蛋白的合成。

另一方面，本發明還提供了前述的用于誘導海水魚類肌肉干細胞快速分化的分化誘導培養基的使用方法，包括以下幾個步驟：

S1：分離得到海水魚類肌肉干細胞。