[發明專利]一種鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202211605428.X
• 申請日: 2022-12-14
• 公開（公告）號: CN116375850A
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 李娥;崔松奇;張文芳;饒瀟君;余海濤;劉興剛;張良;柴沛瑤;李曉靜;崔學毅
• 申請（專利權）人: 豪威生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C07K16/02;C12N7/00;C12N7/04;A61K39/395;A61P31/14;A61P1/16;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 天津兆謙源專利代理事務所(普通合伙) 12265
• 代理人: 許黛君

本發明涉及一種鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體的制備方法和應用。包括制備鴨坦布蘇病毒抗原液、I型鴨肝炎病毒抗原液和Ⅲ型鴨肝炎病毒抗原液的步驟，制備疫苗的步驟，雞場蛋雞免疫程序的建立的步驟以及，制備高免蛋卵黃抗體的步驟。本發明針對鴨坦布蘇病毒、鴨病毒性肝炎病毒提供了一種特異性高、副反應低、外源污染低、操作簡單的免疫原，同時也獲得了易于制備和療效好的鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體，該抗體能夠有效對其病毒進行中和，為鴨坦布蘇病毒病、I型和Ⅲ型病毒性肝炎的防控起到積極作用。本發明還涉及一種前述卵黃抗體在進行鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒的免疫及治療中的應用。

技術領域

本發明屬于獸用疫苗技術領域，涉及一種鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體的制備方法和應用。

背景技術

鴨病毒性肝炎是由鴨甲型肝炎病毒引起的雛鴨高度致死性、傳播迅速的病毒性疾病，一年四季均可發生，多以冬季易發，潛伏期短，病程短。對雛鴨的感染率高，死亡率各異。臨床出現角弓反張癥狀后迅速死亡，剖檢多見肝臟腫脹、出血或者壞死。鴨病毒性肝炎有3個獨立的血清型，其中I型和Ⅲ型之間無交叉中和反應。鴨坦布蘇病毒病是由坦布蘇病毒引起的鴨的生殖、免疫和神經系統性傳染病，潛伏期短，病程短，鴨日齡越小，臨床癥狀越明顯，死亡率越高。臨床癥狀多表現為仰翻、側翻等神經癥狀，剖檢病變為卵泡變形、出血、破裂睪丸萎縮，脾臟早期腫大。

因鴨坦布蘇病毒病和鴨病毒性肝炎具有發病率高、傳播速度塊、發病范圍廣等特性，而實際養殖過程中，環境差，生物安全系數低，使得卵黃抗體成為一種有效的潛在的治療手段。經調研發現，鴨坦布蘇病毒病多以胚體為研究對象展開卵黃抗體的研究，免疫原制備成本高、操作繁瑣，未根據市場檢測狀況及時對鴨坦布蘇病毒和病毒性肝炎病提供一針的防控策略。

發明內容

本發明為解決公知技術中存在的技術問題而提供一種鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體的制備方法，本發明通過蚊源細胞系增殖鴨坦布蘇病毒，雞胚增殖I型鴨肝炎病毒和鴨胚增殖Ⅲ型鴨肝炎病毒開展研究，針對這兩種病毒提供一種特異性高、副反應低、外源污染低、操作簡單的免疫原，同時也獲得了易于制備和療效好的鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體，該抗體能夠有效對其病毒進行中和，為鴨坦布蘇病毒病、I型和Ⅲ型病毒性肝炎的防控起到積極作用。

本發明為解決公知技術中存在的技術問題所采取的技術方案是：一種鴨坦布蘇病毒病、鴨病毒性肝炎病毒二聯三價卵黃抗體的制備方法包括以下步驟，

步驟一，制備鴨坦布蘇病毒抗原液；

S1、蚊源C6/36細胞轉瓶培養；

使用轉瓶培養蚊源C6/36細胞，培養基選取為蚊源細胞用培養基，培養條件為溫度27℃及5％濃度CO₂，每3天進行傳代，傳代后細胞密度為3～5×10⁶cells/ml；

S2、病毒液的制備；

將實驗室分離得到的鴨坦布蘇病毒按照0.05％的劑量同步接種于1.5～4×10⁵cells/ml的細胞懸液中，在溫度27℃及5％濃度的CO₂的條件下貼壁生長96～144小時，根據細胞病變程度收獲細胞病毒液；

S3、收獲抗原液；

將細胞病毒液置于-20℃的溫度條件下凍存一次，取出融化后于冷藏條件下、在3000rpm條件下離心15分鐘，收集上清液后，使用30KD膜包進行5～10倍濃縮，使雞胚效力檢測控制在10^6.0～10^6.5ELD₅₀/0.1ml；

S4、對鴨坦布蘇病毒抗原液進行滅活并保存；

將檢驗合格的抗原液置于滅菌容器內，以終濃度1‰的比例加入甲醛，在37℃的溫度條件下滅活24小時，滅活后置于2～8℃的溫度條件下保存；