[發(fā)明專利]從血漿中提取蛋白質(zhì)的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211536829.4
• 申請(qǐng)日: 2016-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN115925781A
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尤金·祖洛;丹尼斯·柯廷;查爾斯·海爾德布蘭特;大衛(wèi)·彼得·諾萬廷克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 普萊澤瑪科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K1/32
• 分類號(hào): C07K1/32;C07K1/22;C07K1/36;C07K14/435;C07K14/76
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 吳君琴

從血漿產(chǎn)生包括α?1?蛋白酶抑制劑、γ球蛋白、白蛋白和其它蛋白質(zhì)的蛋白質(zhì)產(chǎn)品的方法包括以下步驟：(1)向血液產(chǎn)品中加入鹽產(chǎn)生第一中間產(chǎn)物，其中鹽占所述第一中間產(chǎn)物重量的11?13％；(2)分離所述第一中間產(chǎn)物產(chǎn)生第一上清液和第一糊沉淀；(3)向所述第一中間產(chǎn)物中加入鹽制備第二中間產(chǎn)物，其中鹽占所述第二中間產(chǎn)物重量的21?23％；(4)分離所述第二中間產(chǎn)物產(chǎn)生第二上清液和第二糊沉淀；(5)通過親和層析從所述第二上清液分離第三中間產(chǎn)物；和(6)通過離子交換色譜分離所述第三中間產(chǎn)物產(chǎn)生含有蛋白質(zhì)產(chǎn)品的洗脫液。本發(fā)明的方法有利于簡(jiǎn)單并且以高產(chǎn)率生產(chǎn)α?1?蛋白酶抑制劑、γ球蛋白、白蛋白和其他蛋白質(zhì)。

相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01680069297.4，發(fā)明名稱為“從血漿中提取蛋白質(zhì)的方法”的中國(guó)申請(qǐng)的分案申請(qǐng)，該申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2016年10月14日，其要求了US專利局的申請(qǐng)日2015年10月15日為優(yōu)先權(quán)日。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的領(lǐng)域?yàn)橛糜谔岣擀?1-蛋白酶抑制劑(也稱為α-1抗胰蛋白酶)或其他蛋白質(zhì)產(chǎn)品的純度和產(chǎn)量的改進(jìn)方法。

背景技術(shù)

以下背景技術(shù)討論包括可能有助于理解本發(fā)明的信息，并非承認(rèn)本申請(qǐng)?zhí)峁┑娜魏涡畔楝F(xiàn)有技術(shù)或與當(dāng)前要求保護(hù)的發(fā)明相關(guān)，或者明確或暗示引用的出版物是現(xiàn)有技術(shù)。

Shanbrom的美國(guó)專利第7,297,716號(hào)公開了從冷沉淀中分離血液產(chǎn)品(例如，纖維蛋白膠)的方法。Shanbrom的方法使用鹽來增加冷沉淀的收率。例如，將重量分?jǐn)?shù)為2-10％的檸檬酸鈉加入血液或血漿中。在此濃度下的檸檬酸鈉可以滅活和/或抑制致病微生物，防止細(xì)胞和蛋白質(zhì)變性，增加冷沉淀的收率(即使不冷凍)，并有助于去除變性組分。Shanbrom考慮從冷沉淀中分離各種凝血因子，包括纖維蛋白原、因子II、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、因子X和血小板。然而，Shanbrom未能認(rèn)識(shí)到鹽可以被添加到預(yù)先冷凍的血液產(chǎn)品中，達(dá)到11％(重量)以上的濃度。此外，Shanbrom也不了解可以從任何上清液中提取蛋白質(zhì)產(chǎn)品，其中就包括由具有11-13％(重量)和21-23％(重量)鹽的中間產(chǎn)物形成的上清液。

一種蛋白質(zhì)產(chǎn)品是α-1-蛋白酶抑制劑(“A1PI”)。A1PI是蛋白酶抑制劑的絲氨酸蛋白酶抑制劑超家族中的52kDa糖蛋白。通常，A1PI可以保護(hù)組織，如肺的彈性組織免受嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的傷害，特別是在炎癥部位。A1PI的遺傳缺陷可導(dǎo)致肺氣腫、慢性阻塞性肺病和肝硬化。如果對(duì)A1PI缺陷不進(jìn)行治療，可能會(huì)引起損傷，而施用A1PI則可以預(yù)防這些損傷。

Coan的美國(guó)專利4,697,003公開了一種從血漿蛋白質(zhì)水溶液中分離A1PI的方法。Coan的方法建立在Cohn乙醇分餾技術(shù)上，該技術(shù)包括解凍新鮮冷凍血漿、去除沉淀物，并且將乙醇分五個(gè)階段添加至濃度約40％。Coan方法的第一步是對(duì)Cohn液II+III、液I或冷上清液進(jìn)行脫鹽處理。接著，將脫鹽溶液與陰離子交換樹脂接觸，并且A1PI選擇性地結(jié)合到樹脂上。用淋洗液將A1PI置換至洗脫液。最后，從洗脫液中回收A1PI。然而，乙醇和其他醇可能會(huì)產(chǎn)生問題，因?yàn)樗鼈內(nèi)菀资蛊谕牡鞍踪|(zhì)變性，如A1PI。

Kumpalume等人的美國(guó)專利第8,580,931號(hào)還公開了分離A1PI的方法，其包括將A+1上清液經(jīng)歷兩個(gè)金屬螯合層析步驟。借用Kistler?Nitschmann工藝的術(shù)語，A+1上清液為沉淀物A和組分1的組合。然而，A+1上清液的制備還包括加入17-21％(v/v)的乙醇，其可以使如上所述的蛋白質(zhì)變性。也可參見Thierry的專利DE3874376。

在美國(guó)專利第7,879,331號(hào)、第7,879,332號(hào)和第8,293,242號(hào)中，發(fā)明人構(gòu)想了一種鹽析工藝，可在從血液產(chǎn)品中提取蛋白質(zhì)產(chǎn)品時(shí)不使用乙醇。