[發明專利]一種豬塞尼卡谷病毒病滅活疫苗的制備方法及應用

在審

• 申請號: 202211487367.1
• 申請日: 2022-11-25
• 公開（公告）號: CN115837073A
• 公開（公告）日: 2023-03-24
• 發明（設計）人: 吳珊珊;潘京學;王貴華;黃書林;孫瑤;孟萌;李雙男;張賀楠
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: A61K39/125
• 分類號: A61K39/125;A61K39/39;A61P31/14;C12N7/06
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳

本發明公開了一種豬塞尼卡谷病毒病滅活疫苗制備方法及其應用，該疫苗采用懸浮培養塞尼卡谷病毒、層析方法純化抗原、采用優化的水佐劑制備疫苗，本方法制備的塞尼卡谷病毒滅活疫苗安全性好，能夠誘導仔豬產生高水平的中和抗體，有效的保護豬群免受豬塞尼卡谷病毒強毒的攻擊。

技術領域

本發明屬于獸用生物制品領域，具體涉及一種豬塞尼卡谷病毒病滅活疫苗的制備方法及其應用。

背景技術

SVV是新近發現的一種能夠引起豬特發性水皰病(swine idiopathic vesiculardisease,SIVD))及流行性暫時性新生仔豬損失(epidemic transient neonatal losses,ETNL)急性病原微生物，該病發病率高，病程快，傳播速度快，死亡率較低，但仔豬死亡率高。臨床上主要表現為豬鼻鏡、蹄部冠狀帶水泡、潰爛，跛足、嗜睡，新生仔豬腹瀉及急性死亡等癥狀。2015年，我國廣東地區首發塞內加谷疫情，在2016及2017年，塞內加谷疫情繼續蔓延，在我國多個省市暴發，疫情范圍波及廣東、福建、湖南、河南、黑龍江等省份，臨床癥狀以水皰類病變為特點，偶見低日齡仔豬大量死亡，給養豬業帶來巨大經濟損失，嚴重威脅了我國的公共衛生安全及養殖業發展。

目前關于該病的防控尚無可用的生物疫苗制品。目前，豬塞尼卡谷病的防控依賴于豬場有效管理，但國內養豬模式復雜多樣，豬場管理較為落后，因此研制相應的生物制品防控該疫病的暴發流行十分迫切。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明的目的是針對現有塞尼卡谷病毒生物制品的不足，提供一種有效安全的塞尼卡谷病毒病疫苗大量制備方法；該滅活疫苗所采用的制備方法簡單安全，疫苗免疫效果良好。

(二)技術方案：

本發明通過以下技術方案實現：

本發明提供一種豬塞尼卡谷病毒病滅活疫苗的制備方法，具體步驟如下：

1)病毒液制備所述豬塞尼卡谷病毒抗原的具體制備過程如下：以生物反應器制備懸浮BHK-21細胞，待細胞密度3.0～5.0×10⁶cells/ml，以MOI 0.001～0.1劑量接種塞尼卡谷種毒，接毒后生物反應器控制參數設定為DO 30～60％、pH7.0～7.4、攪拌轉速80～100rpm/min、溫度36.5～37.5℃，期間定時取樣，以0.4％臺盼藍染色觀察細胞病變情況，待細胞活率≤20％時，收獲懸浮培養病毒液。

2)抗原純化上述收獲懸浮培養病毒液經3次反復凍融后，采用連續流離心的方法，病毒液在8000rpm離心30min，棄去細胞碎片沉淀，收集離心上清液。上清液經過500KD中空纖維柱進行反復3次洗濾，收集粗純病毒液。再經分子篩層析凝膠純化進行精純處理，收獲塞尼卡谷純化病毒液。

3)滅活具體過程如下：將除菌過濾的BEI溶液按2％體積加入豬塞尼卡谷純化病毒液中，使BEI終濃度為0.08％，充分混勻后倒罐，待溫度升至30℃后開始計時，滅活36小時，每隔120分鐘攪拌1次。計時結束后將過濾除菌的50％硫代硫酸鈉溶液加入滅活病毒液中，使其終濃度為2％，充分混勻后，滅活后抗原放置2～8℃保存。

疫苗配制

將滅活后豬塞尼卡谷抗原緩慢加入的所述聚合物水性佐劑中，聚合物水性佐劑的量為抗原質量的50％，控制攪拌速度2000轉/分，攪拌溫度25度以下，抗原和佐劑分散均勻完成后，進行分裝標記，即得豬塞尼卡谷水佐劑滅活疫苗。

本發明佐劑制備

所述聚合物水性佐劑由下述質量百分含量的組分組成：

優選的，所述聚合物水性佐劑由下述質量百分含量的組分組成：