[發(fā)明專利]一種靶向干擾新冠病毒S蛋白的小核酸RNA干擾及應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2022-11-14
• 公開（公告）號: CN115851727A
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張韋唯;戴方平
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇中方基因生物醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/65;C12N15/85;A61K31/7105;A61P31/14
• 代理公司: 上海鍛創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31448
• 代理人: 范文琦

1.shRNA，其特征在于，其序列中有義序列為GGTGT TCTTA CTGAG TCTAA C，如SEQ IDNO.10所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的shRNA，其特征在于，其包含如下序列：

AGCTTGGTGTTCTTACTGAGTCTAACTTCAAGAGCGTTAGACTCAGTAAGAACACCTTTTTTG，如SEQ IDNO.8所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的shRNA，其特征在于，其包含如下寡核苷酸組合：

shRNAF:

AGCTTGGTGTTCTTACTGAGTCTAACTTCAAGAGCGTTAGACTCAGTAAGAACACCTTTTTTG，如SEQ IDNO.8所示；

shRNA R:

AATTCAAAAAAGGTGTTCTTACTGAGTCTAACGCTCTTGAAGTTAGACTCAGTAAGAACACCA，如SEQ IDNO.9所示。

4.一種重組質(zhì)粒，其特征在于，包含如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的shRNA。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒還包括用于驅(qū)動(dòng)shRNA表達(dá)的人H1啟動(dòng)子、用于驅(qū)動(dòng)綠色熒光蛋白EGFP基因表達(dá)的pCMV啟動(dòng)子。

6.一種如權(quán)利要求4所述的重組質(zhì)粒的構(gòu)建方法，其特征在于，所述構(gòu)建方法包括如下步驟：

S1、以含有基因轉(zhuǎn)染標(biāo)記的pCMV-EGFP基因的pSIL-EGFP載體為基本載體；

S2、人類RNA聚合酶III型啟動(dòng)子H1啟動(dòng)子通過XhoI和HindIII酶切位點(diǎn)構(gòu)建于pCMV-EGFP區(qū)域的上游；

S3、shRNA通過HindIII和EcoRI構(gòu)建位點(diǎn)整合在H1啟動(dòng)子下游。

7.一種新冠病毒S蛋白抑制劑，其特征在于，至少包含下述之一：

a、權(quán)利要求1或2所述shRNA；

b、權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒。

8.一種試劑盒，其特征在于，至少包含下述之一：

A、權(quán)利要求1或2所述shRNA；

B、權(quán)利要求3所述的重組質(zhì)粒；

C、權(quán)利要求7所述的新冠病毒S蛋白基因抑制劑。

9.如權(quán)利要求1或2所述的shRNA在制備治療新冠病毒的藥物中的應(yīng)用。

10.如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述shRNA在靶向干擾SARS-CoV-2中的應(yīng)用。

11.一種靶向干擾新冠病毒S蛋白的特異性shRNA的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

從SARS-CoV-2提取S蛋白基因的813nt片段作為shRNA靶點(diǎn)，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，其包括S蛋白質(zhì)基因的RBD區(qū)域部分和RBD之后的高度保守的部分下游區(qū)域。