[發明專利]一種羅非魚Igλ單克隆抗體及應用

在審

• 申請號: 202211340017.2
• 申請日: 2022-10-29
• 公開（公告）號: CN115786274A
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發明（設計）人: 張永安;張旭杰;藥園園;劉訓;宋燕玲
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/577
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種羅非魚Igλ單克隆抗體及應用，所述的單抗由雜交瘤細胞株（CCTCC NO:C202137）分泌獲得，該抗體能夠特異性識別血清中Igλ鏈及組織中Igλ⁺B細胞，進一步的使用鼠抗Igλ的單抗檢測了無乳鏈球菌感染后羅非魚血清中識別無乳鏈球菌表面抗原Sip的抗體水平，結果顯示羅非魚血清中識別Sip的抗體水平顯著增加，表明此抗體可以用于檢測羅非魚免疫后的抗體水平，為羅非魚疫苗的研發和免疫效果的評價奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，涉及一種羅非魚Igλ單克隆抗體及應用。

背景技術

羅非魚(Oreochromis mossambicus)是世界性經濟魚類，具有生長快、肉質好、繁殖能力強、適應性廣等優點。但近年來病害頻發，其中由無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)引起的鏈球菌病尤為突出，給養殖戶造成巨大的經濟損失。由于抗生素的不斷使用，抗生素耐藥性問題日益嚴重，嚴重影響水產養殖業的可持續發展，而疫苗可激活魚類免疫系統，提高機體針對特定病原的抗病力，將是羅非魚鏈球菌病的重要免疫預防手段，也是未來魚類疾病防控的主流方向。但對于疫苗免疫效果的評價往往過程繁瑣，耗時較長，且缺乏評價標準，而以魚類免疫球蛋白(Ig)的單克隆抗體為基礎，通過分析被接種疫苗的魚類的血液和黏液中抗體(分泌到體液中的抗原特異性Ig)水平變化規律來評價疫苗免疫效果的方法，將為建立羅非魚疫苗免疫效果的評價標準體系提供有力的工具。因此對羅非魚Ig單克隆抗體的研究有助于深入了解羅非魚體液免疫應答規律，并能幫助建立羅非魚抗體分析與檢測方法，繼而建立以羅非魚抗體水平為基礎評價疫苗免疫效果的方法，推動羅非魚免疫診斷與疫苗接種等疫病防控技術的發展。

硬骨魚類含有3種免疫球蛋白，即：IgM、IgT和IgD，其中起抗體功能的主要為IgM和IgT。現有研究表明，硬骨魚類IgM主要在系統免疫中起功能，而IgT主要在黏膜免疫中起功能。很多疫苗，尤其是口服和浸泡疫苗，能同時激活機體的系統免疫和黏膜免疫，因此，要準確評價此類疫苗的接種效果，就需要同時檢測IgM和IgT的抗體滴度，這需要同時有這兩類Ig的抗體，且制備和檢測都費時費力。

魚類Ig輕鏈包括Igλ、Igσ和Igκ三個亞型，由于魚類Ig輕鏈的恒定區只有一個Ig結構域，而重鏈恒定區至少含有4個Ig結構域，因此在單抗篩選過程中針對輕鏈的雜交瘤細胞較少，所以抗魚類Ig輕鏈的單克隆抗體比抗重鏈的單克隆抗體更難獲得。到目前為止，已報道的能識別魚類Ig輕鏈的單克隆抗體只有抗斑點叉尾鮰Igσ和Igκ的單克隆抗體，尚無針對Igλ的單克隆抗體。

發明內容

本發明針對現有技術中羅非魚Igλ單克隆抗體缺失的問題，提供了一種分泌鼠抗羅非魚Igλ單克隆抗體的雜交瘤細胞，所述雜交瘤細胞株的保藏編號為：CCTCC NO:C202137。

本發明的另一個目的在提供了羅非魚Igλ單克隆抗體，其由保藏編號為：CCTCCNO:C202137的雜交瘤細胞分泌得到。

本發明的最后一個目的在于提供了上述雜交瘤細胞分泌的單抗在檢測羅非魚免疫球蛋白Igλ中的應用。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案是：

申請人利用純化的天然羅非魚IgM作為抗原，免疫小鼠，進行陽性B細胞、WB、單抗產量等條件的篩選，最終獲得了一株雜交瘤細胞株，該雜交瘤細胞株分泌的單抗，特異性地識別Igλ，單抗產量大，效價高，上述雜交瘤細胞，已于2021年01月27日保藏于中國典型培養物保藏中心，分類命名：雜交瘤細胞株4-6，保藏編號為：CCTCC NO:C202137，地址為：中國武漢武漢大學。

本發明的保護范圍還包括：由保藏編號為：CCTCC NO:C202137的雜交瘤細胞分泌得到的單抗。