[發明專利]用于多交叉恒溫擴增結合納米生物傳感檢測肺炎支原體的引物組合和檢測肺炎支原體的方法

在審

• 申請號: 202211306688.7
• 申請日: 2019-03-19
• 公開（公告）號: CN115807062A
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 申阿東;王亞翠;焦偉偉
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京兒童醫院
• 主分類號: C12Q1/6844
• 分類號: C12Q1/6844;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35
• 代理公司: 北京恒律知識產權代理有限公司 11416
• 代理人: 任霜

1.一種用于多交叉恒溫擴增結合納米生物傳感檢測肺炎支原體的引物組合，其特征在于，所述引物組合包括置換引物、交叉引物和擴增引物；

所述置換引物包括序列如SEQ ID NO:1所示的置換引物F1和序列如SEQ ID NO:2所示的置換引物F2；

所述交叉引物包括序列如SEQ ID NO:3所示的交叉引物CP1和序列如SEQ ID NO:4所示的交叉引物CP2；

所述擴增引物包括序列如SEQ ID NO:5所示的擴增引物C1，序列如SEQ ID NO:6所示的擴增引物C2，序列如SEQ ID NO:7所示的擴增引物D1，序列如SEQ ID NO:8所示的擴增引物D2，序列如SEQ ID NO:9所示的擴增引物R1和序列如SEQ ID NO:10所示的擴增引物R2；其中在擴增引物C1或者C2的5’端標記半抗原，在擴增引物D1或者D2的5’端標記生物素。

2.根據權利要求1所述的擴增引物，其特征在于，在所述擴增引物C1的5’端標記半抗原，標記半抗原后的引物定義為擴增引物C1*；在所述擴增引物D1的5’端標記生物素，標記生物素后的引物定為擴增引物D1*。

3.根據權利要求2所述的擴增引物，其特征在于，在所述擴增引物C1*的5’端所標記的半抗原為熒光素。

4.權利要求1～3任一項所述的引物組合在制備檢測肺炎支原體的試劑盒中的應用。

5.一種基于非診斷目的的多交叉恒溫擴增結合納米生物傳感檢測目的基因的方法，所述方法包括以下步驟：

(1)提取待檢測樣品的基因組；

(2)提供權利要求1所述的引物組合；

(3)在鏈移位型聚合酶、解鏈溫度調節劑、步驟(2)引物組合存在下，使用待檢測樣品的基因組核酸作為模板恒溫擴增DNA；

(4)使用納米生物傳感器檢測步驟(3)的擴增產物。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述納米生物傳感器包括一背板，在所述背板上依次設置裝有樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜及吸水墊，在所述硝酸纖維素膜上依次設置檢測線及控制線，在結合墊、檢測線及控制線區域依次包被有色基團修飾的親和素化的高分子納米粒子、羊抗FITC抗體及生物素偶聯的牛血清蛋白。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴增是在64-66℃的環境中進行的。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴增是在65℃的環境中進行的。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述恒溫擴增的時間為30分鐘。