[發明專利]一種復合微球固定化酶及其固定化方法和應用

在審

• 申請號: 202211305061.X
• 申請日: 2022-10-24
• 公開（公告）號: CN115505586A
• 公開（公告）日: 2022-12-23
• 發明（設計）人: 黃哲倫;王德強
• 申請（專利權）人: 安徽工業大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N9/20;C12N9/34;C12N9/50;A61K38/46;A61K38/47;A61K38/48;A61K9/16;A61P1/14
• 代理公司: 安徽順超知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34120
• 代理人: 陳慕

本發明屬于固定化酶技術領域，具體涉及一種復合微球固定化酶及其固定化方法和應用，該復合微球固定化酶是由消化酶負載于復合微球載體上得到的，所述復合微球載體為亞微米級的果膠/殼聚糖微球；所述消化酶為脂肪酶、蛋白酶、糖化酶中的至少一種；所述果膠/殼聚糖微球是由低酯化度的果膠、殼聚糖按一定質量比進行交聯反應得到的微球。本發明制備的復合微球固定化酶具有微球直徑均勻、人消化酶載量高、固載后不易脫落和流失的優點，實現將固定化酶通過載體穩定的輸送到人體中，可用于制備治療人體消化不良的藥物。

技術領域

本發明屬于固定化酶技術領域，具體涉及一種復合微球固定化酶及其固定化方法和應用。

背景技術

近年來，微納米載體給酶固定化領域帶來了決定性的變化。越來越多的新材料和新的固定化方法正在迅速涌現。將酶固定在納米或微載體上的要求主要是為了提高酶的負載能力和活性，提高酶的穩定性；提升酶與底物的親和力，促進酶與底物的分離。

但是，如何將固定化酶通過載體穩定的輸送到人體中仍然是一項艱巨的任務。

發明內容

本發明的目的在于克服傳統技術中存在的上述問題，提供一種復合微球固定化酶及其固定化方法和應用。

為實現上述技術目的，達到上述技術效果，本發明是通過以下技術方案實現：

本發明提供一種復合微球固定化酶，該復合微球固定化酶是由消化酶負載于復合微球載體上得到的，所述復合微球載體為亞微米級的果膠/殼聚糖微球。

進一步地，上述復合微球固定化酶中，所述消化酶為脂肪酶、蛋白酶、糖化酶中的至少一種。

進一步地，上述復合微球固定化酶中，所述消化酶在負載后的酶活保留率＞75％。

進一步地，上述復合微球固定化酶中，所述果膠/殼聚糖微球是由低酯化度的果膠、殼聚糖按一定質量比進行交聯反應得到的微球。

進一步地，上述復合微球固定化酶中，所述果膠、殼聚糖的質量比為0.5～2:1。

本發明還提供一種復合微球固定化酶的固定化方法，該固定化方法采用分步固定化方式，具體包括如下步驟：

1)將一定體積的75％硫酸溶液溶于適量的去離子水中，稱取果膠加入上述酸性溶液降解；于60℃下保溫4～8h，得到A溶液。

2)將一定體積的冰醋酸溶于適量的去離子水中，稱取殼聚糖加入后混合均勻，超聲一段時間，得到B溶液；

3)將得到的A溶液和B溶液混合，并用高壓均質機在10000rpm下處理3～10min，靜置一段時間后，得到果膠/殼聚糖微球混合液；

4)將得到的果膠/殼聚糖微球混合液與消化酶混合，并用高壓均質機在10000rpm下處理3～5min。

進一步地，A溶液中的果膠和B溶液中的殼聚糖的質量比為0.5～2:1；果膠/殼聚糖微球混合液中的果膠/殼聚糖微球和消化酶的質量比為1:0.25～0.75。

本發明還提供一種復合微球固定化酶的固定化方法，該固定化方法采用同步固定化方式，具體包括如下步驟：

1)將一定體積的75％硫酸溶液溶于適量的去離子水中，稱取果膠加入上述酸性溶液降解；于60℃下保溫4～8h，得到A溶液。

2)將一定體積的冰醋酸溶于適量的去離子水中，稱取殼聚糖加入后混合均勻，超聲一段時間，得到B溶液；

3)將消化酶配置成2g/L的酶溶液，記為C溶液；

4)將得到的A溶液、B溶液、C溶液按照一定配比進行混合，用高壓均質機在10000rpm下處理3～5min。