[發明專利]一種抗線粒體抗體M2的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202211253191.3
• 申請日: 2022-10-13
• 公開（公告）號: CN115327099B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 劉閔
• 申請（專利權）人: 蘇州惠中生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/531;G01N33/543;G01N21/76;G01N35/00
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 周敏

本發明提供一種抗線粒體抗體M2的檢測試劑盒，其包括第一試劑、第二試劑、磁微粒試劑以及化學發光底物。第一試劑包括偶聯有生物素的M2抗原、以及第一緩沖液，第一緩沖液中含有苯甲基磺酰氟、二硫蘇糖醇、以及丙酮酸及其鹽或衍生物。第二試劑包括偶聯有堿性磷酸酶的抗人IgG抗體、以及第二緩沖液。本申請在保證試劑盒的檢測準確性、靈敏度、精密度等性能的同時，能夠有效提高試劑盒中試劑的穩定性，從而有效延長了試劑盒的保存時間。

技術領域

本發明具體涉及一種抗線粒體抗體M2的檢測試劑盒。

背景技術

抗線粒體抗體(Anti-Mitochondrial Antibody，AMA)的主要靶抗原為丙酮酸脫氫酶復合物。九個分子被認為是AMA的靶抗原，分別為M1-M9，其中M2為主要靶抗原。AMA-M2抗體被認為是原發性膽汁性肝硬化（PBC）的高度特異性抗體，在大約90％的PBC患者中可檢測到。

目前，對于AMA-M2抗體檢測方法主要為間接免疫熒光法、酶聯免疫吸附法及化學發光法。

間接免疫熒光法(Indirect Immunofluorescence，IIF)的基本原理是用特異性的抗體與切片中的抗原結合后，用間接熒光抗體，與前面的抗原抗體復合物結合，形成抗原抗體熒光復合物。在熒光顯微鏡下，根據復合物的發光情況來確定所檢測的抗原。該方法由于結合在抗原抗體復合物上的熒光素抗體增多，發出的熒光亮度強，因而其敏感性強。但是具有以下不足：（1）在分析結果時無法根據分子量的大小區分非特異性識別；（2）操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫院難以推廣，也不太適用于標本量較多的實驗室；（3）熒光測定中的本底較高，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難；（4）結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足。

酶聯免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)檢測AMA-M2，具有簡便易行、特異性高的優點，與間接免疫熒光法聯合檢測，可為臨床上對PBC的診斷和治療提供更為客觀的實驗依據。但與其他生物檢測或免疫檢測比較，酶聯免疫吸附法的測定方法、技術、工具或產品仍有較多的不足而使其應用受限，這些不足主要包括以下幾個方面：（1）檢測試劑在檢測過程中為開放方式，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果；（2）酶聯免疫吸附法多采用辣根過氧化物酶進行檢測，其檢測范圍和靈敏度都較低；（3）酶聯免疫吸附法的檢測時間通常較長，完成一個測試所需的總時間一般在2h以上，不能完全滿足臨床上的快速診斷的需求；（4）酶聯免疫吸附法不能隨機進樣檢測，檢測結果存在滯后性。

近年來，納米磁微?；瘜W發光檢測技術得到了廣泛使用，將其應用到檢測抗線粒體抗體中，不僅能具有酶聯免疫吸附法的所有優點，并且靈敏度更高，線性范圍更寬。

中國專利CN107860914A，專利名稱“一種抗線粒體抗體IgG的檢測試劑盒及其檢測方法”，公開了納米磁微?；瘜W發光法檢測抗線粒體抗體M2。該專利利用多種來源組成的混合抗原提高檢測的靈敏度和線性范圍。但是，該專利中的試劑盒的穩定性仍有待提高。

發明內容

本發明的目的是提供一種穩定性更高，從而能夠有效延長試劑盒的保存時間的抗線粒體抗體M2的檢測試劑盒。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：

一種抗線粒體抗體M2的檢測試劑盒，所述檢測試劑盒包括第一試劑、第二試劑、磁微粒試劑以及化學發光底物，所述第一試劑包括偶聯有生物素的M2抗原、以及第一緩沖液，所述第一緩沖液中含有0.005g/L~0.05g/L的苯甲基磺酰氟（PMSF）、0.01g/L~0.1g/L的二硫蘇糖醇以及1g/L~2g/L的丙酮酸及其鹽或衍生物，所述第二試劑包括偶聯有堿性磷酸酶的抗人IgG抗體、以及第二緩沖液。

優選地，所述苯甲基磺酰氟的濃度為0.005g/L~0.03g/L，例如0.006g/L、0.008g/L、0.012g/L、0.016g/L、0.018g/L、0.020g/L。