[發明專利]一種過表達HS3ST5基因的試劑在促進病毒感染中的應用及重組CHO-K1細胞系

在審

• 申請號: 202211248062.5
• 申請日: 2022-10-12
• 公開（公告）號: CN116144707A
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 白興文;盧曾軍;袁紅;黃磊;宮曉華;劉在新;包慧芳;李平花;孫普;李冬;馬雪青;陳應理;曹軼梅;付元芳;張婧;鄧欣雨;焦云娟;王利豪;楊宇軒
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/54;C12N5/10;C12N7/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 薛紅凡

本發明提供了一種過表達HS3ST5基因的試劑在促進病毒感染中的應用及其構建的重組CHO?K1細胞系，屬于基因工程技術領域。本發明提供通過將HS3ST5片段克隆到慢病毒載體中構建出重組慢病毒質粒，再經病毒拯救包裝出的慢病毒，感染CHO?K1細胞，獲得表達HS3ST5的重組CHO?K1細胞系。穩定表達HS3ST5的重組CHO?K1細胞會促進FMDV的吸附、內化、基因復制和子代病毒生成，這為研究病毒致病機制提供了工具，為后續制備病毒感染細胞模型提供了基礎。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種過表達HS3ST5基因的試劑在促進病毒感染中的應用及重組CHO-K1細胞系。

背景技術

硫酸乙酰肝素(HS)是一類線性硫酸化的異構多糖，大量存在于哺乳動物細胞表面和細胞外基質中。HS能與多種配體結合，被認為是一種非特異性細胞表面受體。研究發現HS通過獨特的單糖序列協助病毒感染，因此，HS可以作為病毒感染靶細胞的特異性受體。進一步研究表明HS參與病毒的吸附和入胞過程，有利于病毒在宿主細胞內的增殖。1型單純皰疹病毒(HSV-1)和口蹄疫病毒(FMDV)可以利用HS作為病毒受體感染靶細胞。登革病毒(DENV)和人類免疫缺陷病毒(HIV)等多種病毒利用特定的HS多糖結構感染細胞。此外，對于當前流行的嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(SARS-CoV-2)，HS也已被證實作為輔助受體與血管緊張素轉化酶2(ACE2)直接結合，促進SARS-CoV-2吸附和入侵宿主細胞。HS生物合成修飾酶通過修飾HS硫酸化程度和多糖結構等影響HS蛋白的結合特異性以及生物學功能。硫酸乙酰肝素3-O-硫酸基轉移酶(HS3ST)是HS生物合成的關鍵酶，能夠催化硫酸基團從硫酸基供體轉移到氨基葡萄糖的3-OH位置而形成3-O-硫酸化的HS。HS3ST包括7種異構體，其中HS3ST5的生物活性最強。目前，HS3ST5對病毒感染影響的研究還很少，也沒有穩定表達HS3ST5細胞系構建及其應用的報道。

小RNA病毒在醫學和獸醫學中具有重要作用，其研究成果具有重要參考價值。FMDV是一種經典的小RNA病毒，常作為模式病毒來研究病毒-宿主之間的相互作用。病毒對宿主細胞表面受體的利用不僅決定了病毒的入侵效率和復制能力，更決定了病毒的宿主范圍與致病力。在FMDV野毒株適應細胞培養的過程中，病毒獲得了利用HS作為受體感染細胞的能力。FMDV識別并結合細胞膜表面的HS受體而吸附在宿主細胞上，隨后通過HS介導的內吞作用進入細胞內。FMDV和HS互作研究多關注于不同FMD毒株和同一毒株上關鍵氨基酸殘基對于HS的利用效率和能力。尚不清楚HS修飾酶HS3ST5對FMDV復制的影響。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種過表達HS3ST5基因的試劑在促進病毒吸附和入侵宿主細胞中的應用。

本發明提供了一種過表達HS3ST5基因的試劑在促進病毒感染中的應用。

優選的，所述HS3ST5基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。

優選的，所述過表達HS3ST5基因的試劑包括過表達HS3ST5基因的重組慢病毒質粒。

優選的，所述提高病毒感染性包括促進病毒吸附和入侵宿主細胞的能力、提高病毒基因復制和子代病毒復制水平。

優選的，所述病毒包括利用HS受體入侵細胞的病毒。

優選的，所述利用HS受體入侵細胞的病毒包括口蹄疫病毒、嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒和單純皰疹病毒中的一種或幾種。

本發明提供了一種穩定表達HS3ST5的重組細胞系，所述重組細胞系過表達HS3ST5蛋白。

本發明提供了所述穩定表達HS3ST5的重組細胞系的構建方法，包括以下步驟：

1)構建過表達HS3ST5基因的重組慢病毒質粒；