[發(fā)明專利]超聲引導(dǎo)下構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法

在審

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• 申請日: 2022-10-12
• 公開（公告）號: CN115581218A
• 公開（公告）日: 2023-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張世玉;湯佳馨;張雨欣;張展維;梁澤純;湯慶
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院（廣州呼吸中心）
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02;C12N5/09
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 王海文

本發(fā)明公開了一種超聲引導(dǎo)下構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法，涉及周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型技術(shù)領(lǐng)域，所述的方法，步驟如下：S1.VX2瘤塊制備；S2.麻醉；S3.VX2瘤塊植入：超聲觀察兔肺及胸膜回聲，選擇聲窗良好的肋間隙，在超聲實(shí)時引導(dǎo)下與臟層胸膜呈45°斜行進(jìn)針至臟層胸膜下，然后改變進(jìn)針角度至30°繼續(xù)前進(jìn)0.3?0.5cm，注入腫瘤組織懸液，旋轉(zhuǎn)穿刺針后快速退針，紗布壓迫，超聲觀察進(jìn)針位置有無出血、氣胸；S4.觀察：腫瘤組織懸液注射后7、10、14天超聲觀察肺部結(jié)節(jié)形成情況，并取腫瘤組織，進(jìn)行HE染色、彈力纖維染色。本發(fā)明提供的方法可以精準(zhǔn)、安全、高效的構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型，準(zhǔn)確度高且可靠性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種超聲引導(dǎo)下構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法。

背景技術(shù)

肺癌對胸膜的侵犯程度分為4類：PL0，腫瘤局限在臟層胸膜彈性纖維層下；PL1，腫瘤突破纖維層，但未達(dá)臟層胸膜全層；PL2，腫瘤突破臟層胸膜全層，尚未累及壁層胸膜；PL3，腫瘤累及壁層胸膜或胸壁組織，對其治療方法的選擇具有重要影響。相對于沒有胸膜侵犯的肺癌，伴有PL3的肺癌，手術(shù)切除范圍明顯擴(kuò)大；而伴有PL1/PL2的肺癌，手術(shù)完全切除后仍需要繼續(xù)化療。目前影像學(xué)技術(shù)對PL3類胸膜侵犯的術(shù)前診斷率已達(dá)90％以上，但無法對PL1/PL2類胸膜侵犯在術(shù)前做出精準(zhǔn)診斷。因此，術(shù)前精準(zhǔn)評估肺癌對臟層胸膜的侵犯程度(PL1/PL2)是亟需解決的臨床問題。

動物實(shí)驗是解決臨床問題的有效途徑，而目前尚無高效構(gòu)建肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法。CT引導(dǎo)下構(gòu)建肺癌動物模型，腫瘤組織或細(xì)胞放置深度難以精準(zhǔn)控制，生長至臟層胸膜侵犯需要較長的周期，且存在放射性。胸腔切開法雖然可以把腫瘤組織放置在胸膜下，但創(chuàng)傷大，并發(fā)癥多，死亡率高。

超聲是一種分辨率高、實(shí)時引導(dǎo)、操作簡便的成像方式，在胸壁、胸膜及胸膜下結(jié)節(jié)穿刺活檢中廣泛應(yīng)用，安全性高。

目前，還沒一種在超聲引導(dǎo)下精準(zhǔn)、安全、高效的構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明提供了一種超聲引導(dǎo)下構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法。能在超聲引導(dǎo)下精準(zhǔn)、安全、高效的構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型。

本發(fā)明的目的在于保護(hù)一種超聲引導(dǎo)下構(gòu)建周圍型肺癌侵犯臟層胸膜動物模型的方法，步驟如下：

S1.VX2瘤塊制備：復(fù)蘇VX2腫瘤組織，復(fù)蘇后進(jìn)行剪切，得到VX2腫瘤組織塊，注射至兔下肢肌層，進(jìn)行培養(yǎng)，得到新鮮的腫瘤塊，剔除壞死部分，留取魚肉樣、質(zhì)韌的腫瘤組織，置于生理鹽水溶液中剪切，制得腫瘤組織懸液，備用；

S2.麻醉：取新西蘭兔，建立耳緣靜脈通道，注射3％的戊巴比妥鈉溶液，麻醉后，左側(cè)臥位固定，將右側(cè)胸部進(jìn)行脫毛并消毒；

S3.VX2瘤塊植入：超聲觀察兔肺及胸膜回聲，選擇聲窗良好的肋間隙，在超聲實(shí)時引導(dǎo)下與臟層胸膜呈45°斜行進(jìn)針至臟層胸膜下，然后改變進(jìn)針角度至30°繼續(xù)前進(jìn)0.3-0.5cm，注入腫瘤組織懸液，旋轉(zhuǎn)穿刺針后快速退針，紗布壓迫，超聲觀察進(jìn)針位置有無出血、氣胸；

S4.觀察：腫瘤組織懸液注射后7、10、14天超聲觀察肺部結(jié)節(jié)形成情況，并取腫瘤組織，進(jìn)行HE染色、彈力纖維染色。

優(yōu)選地，步驟S1中，所述的復(fù)蘇后進(jìn)行剪切為剪切至1mm³；所述的置于生理鹽水溶液中剪切為剪切至1mm³。

優(yōu)選地，步驟S1中，所述的魚肉樣、質(zhì)韌的腫瘤組織和生理鹽水溶液的重量份數(shù)比為1：10。

優(yōu)選地，步驟S1中，所述的注射為利用5ml注射器配18G針頭注射。