[發(fā)明專利]用于檢測(cè)人類中性粒細(xì)胞抗原基因分型的引物組合、試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202211240389.8
• 申請(qǐng)日: 2022-10-11
• 公開（公告）號(hào): CN116083551A
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李恒聰;吳國(guó)光;鐘周琳;周燕;李麗蘭;陳潔潤(rùn);盧芳;蔣麗紅;莫慧慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南寧中心血站（南寧輸血醫(yī)學(xué)研究所）
• 主分類號(hào): C12Q1/6881
• 分類號(hào): C12Q1/6881;C12N15/11;C12Q1/686
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.用于檢測(cè)人類中性粒細(xì)胞抗原基因分型的引物組合，其特征在于，檢測(cè)的基因位點(diǎn)及對(duì)應(yīng)的正向引物、反向引物和延伸引物的序列如下表所示：

2.一種用于檢測(cè)人類中性粒細(xì)胞抗原基因分型的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組合。

3.應(yīng)用權(quán)利要求1所述引物組合檢測(cè)人類中性粒細(xì)胞抗原基因分型的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、提取待測(cè)樣本DNA；

S2、以S1的DNA為模板，使用多重PCR技術(shù)擴(kuò)增含有目的SNP的DNA序列，擴(kuò)增引物為權(quán)利要求1中的正向引物和反向引物；

S3、擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物SAP處理后，利用權(quán)利要求1中的延伸引物進(jìn)行單堿基延伸；

S4、獲得的單堿基延伸產(chǎn)物，轉(zhuǎn)移到SpectroCHIP芯片上，進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，確定其基因型。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，S2中擴(kuò)增體系為：超純水0.8μL，含20mM?Mg²⁺的10×PCR?Buffer?0.5μL，25mM?MgCl₂?0.4μL，25mM?dNTP0.1μL，0.5μM?PCR引物混合液1.0μL，5U/μL?HotstarTaq酶0.2μL，20-50ng/μL的人基因組DNA溶液2.0μL。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，S2中擴(kuò)增程序?yàn)椋?5℃，2min；45個(gè)循環(huán)95℃，30sec，56℃，30sec，72℃，1min；72℃，保持5min，4℃保溫。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，S3中SAP處理體系為：超純水1.53μL，SAP緩沖液0.17μL，SAP酶0.30μL。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，S3中SAP處理程序?yàn)椋?7℃40min；85℃，5min；4℃保溫。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，S3中延伸體系為：超純水0.62μL，PLEXBuffer緩沖液0.2μL，iPLEX?Termination?Mix?0.2μL，延伸引物混合液0.94μL，iPLEX?ProEnzyme酶0.04μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，S3中延伸程序?yàn)椋?/p>

94℃，30sec；

40個(gè)循環(huán)：94℃，5sec；(52℃，5sec；80℃，5sec)5個(gè)循環(huán)；

72℃，3min；

4℃保溫。