[發明專利]一種化學-酶催化法制備植物源膽固醇的方法

在審

• 申請號: 202211238108.5
• 申請日: 2022-10-11
• 公開（公告）號: CN115466773A
• 公開（公告）日: 2022-12-13
• 發明（設計）人: 系祖斌;艾文;陶琳;馬雷;熊興
• 申請（專利權）人: 湖北共同生物科技有限公司
• 主分類號: C12P33/06
• 分類號: C12P33/06;C12P33/00
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 董大媛

1.一種化學-酶催化法制備植物源膽固醇的方法，其特征在于，植物源膽固醇的合成路線為：

所述化學-酶催化法制備植物源膽固醇的方法包括如下步驟：

1)將雙降醇、氧化酶、輔酶和輔酶再生體系混合進行酶促反應，得到化合物1；

2)在保護氣氛下，將化合物1、1-氯-3-甲基丁烷、三苯基膦和叔丁醇鉀進行反應，得到化合物2；

3)化合物2、烯烴還原酶、輔酶和輔酶再生體系混合進行酶促反應，得到化合物3；

4)將化合物3、對甲苯磺酸、原甲酸三乙酯和溶劑混合進行醚化反應，得到化合物4；

5)將化合物4、脂肪酶、烯烴還原酶、輔酶和輔酶再生體系混合進行酶促反應，得到植物源膽固醇。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述氧化酶為檸檬酸脫水酶或磷酸葡糖酸脫水酶；所述輔酶為NADP⁺或NAD⁺；所述輔酶再生體系為谷氨酸脫氫酶或乳酸脫氫酶。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟1)所述雙降醇、氧化酶、輔酶和輔酶再生體系的質量比為1：0.05～0.15：0.1～0.3：0.2～0.5；所述酶促反應的溫度為30～40℃，酶促反應的時間為3～5h。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟2)所述保護氣氛為氮氣或氬氣；所述反應的溫度為18～25℃，反應的時間為3～4h；所述化合物1、1-氯-3-甲基丁烷、三苯基膦和叔丁醇鉀的摩爾比為1：1.8～2.5：1.8～2.5：2～3.5。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3)所述輔酶為NADPH或NADH；輔酶再生體系為甲酸脫氫酶、葡萄糖脫氫酶或醇脫氫酶；化合物2、烯烴還原酶、輔酶和輔酶再生體系的質量比為1：0.05～0.15：0.1～0.3：0.2～0.5。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3)所述酶促反應的溫度為30～40℃，酶促反應的時間為3～5h。

7.根據權利要求4～6任一項所述的方法，其特征在于，步驟4)所述化合物3和對甲苯磺酸的質量比為1：0.05～0.1；化合物3、原甲酸三乙酯和溶劑的質量體積比為1～1.2g：1～1.2mL：1.5～4mL。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟4)所述醚化反應的溫度為45～55℃，醚化反應的時間為2～4h；所述溶劑為甲醇、乙醇或二甲基亞砜。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟5)所述化合物4、脂肪酶、烯烴還原酶、輔酶和輔酶再生體系的質量比為1：0.03～0.08：0.03～0.08：0.1～0.3：0.2～0.5；輔酶包含質量比為1～2：2～3的NAD⁺和NADH。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于，步驟5)所述脂肪酶為磷酸酯酶或羧酸酯酶；所述酶促反應的溫度為25～35℃，酶促反應的時間為4～5h。