[發(fā)明專利]一種高效降血壓水產(chǎn)品活性肽的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202211152002.3
• 申請日: 2022-09-21
• 公開（公告）號: CN115368441A
• 公開（公告）日: 2022-11-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 汪蘭;吳文錦;陳夢婷;熊光權(quán);丁安子;石柳;陳勝;喬宇;陳朗
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/06;C07K1/34;C07K17/14;C07K17/08;A61P9/12
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 黃行軍

1.一種高效降血壓水產(chǎn)品活性肽的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟1、利用胃蛋白酶酶解超高壓處理后的鳙魚肉得到粗多肽，將粗多肽進(jìn)行分離、純化、鑒定后篩選出ACE潛在活性最大的肽段YLRLHF；具體步驟如下：

1)粗多肽的制備：

300MPa超高壓處理鳙魚肉20min，得到超高壓處理后的鳙魚肉；按超高壓處理后的鳙魚肉：水的質(zhì)量比＝1：5，在超高壓處理后的鳙魚肉中加入水，加入4000μ/g的胃蛋白酶，在55℃水浴下反應(yīng)6h；95℃水浴中加熱10min終止反應(yīng)，水解產(chǎn)物離心，收集上清液利用透析袋(MD77-5M)透析除鹽即為粗多肽；

2)多肽的分離、純化：

將粗多肽使用裝有5kDa截留超濾膜的超濾杯超濾，膜壓力為0.05MPa，得到分子量5kDa和5kDa的兩個級分，5kDa被凍干后利用質(zhì)譜測定氨基酸序列，選取置信值＞99％的肽段通過PeptideRanker軟件進(jìn)行活性評分，對評分結(jié)果＞0.5的肽段進(jìn)行分子對接，根據(jù)分子對接結(jié)果篩選出ACE潛在活性最大的肽段YLRLHF(酪氨酸-亮氨酸-精氨酸-亮氨酸-組氨酸-苯丙氨酸)；

步驟2、利用PepPowerTM多肽合成平臺通過固相合成法合成了多肽序列YLRLHF，得到ACE抑制肽YLRLHF；

步驟3、將納米級材料溶于水超聲2h后制備得到0.1mg/mL的分散液；

所述納米級材料為：納米級氧化石墨烯(GO)、羧基介孔二氧化硅納米顆粒(CarboxylMesoporous Silica Nanoparticles，CMSN)、聚乙二醇包裹金納米粒子(末端羧基修飾)(Gold Nanoparticles-PEG-N3，GN-P)、羧基功能化的四氧化三鐵(DMSA@Fe₃O₄)中的一種；

步驟4、10倍納米級材料為質(zhì)量分?jǐn)?shù)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDCl)和20倍納米級材料為質(zhì)量分?jǐn)?shù)的N-羥基硫代琥珀酰亞胺(NHS)加入到分散液中，并攪拌5min；

步驟5、按步驟2得到的ACE抑制肽YLRLHF：納米級材料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1-2:2-1，再加入步驟2得到的ACE抑制肽YLRLHF，混合均勻后磁力攪拌器上反應(yīng)6h，得到反應(yīng)液；

步驟6、將步驟5得到的反應(yīng)液離心，沉淀物用超純水洗滌3次，冷凍干燥后得到高效降血壓水產(chǎn)品活性肽。

2.如權(quán)利要求1所述一種高效降血壓水產(chǎn)品活性肽的制備方法，其特征在于，步驟1的粗多肽的制備中水解產(chǎn)物離心為：水解產(chǎn)物在離心力為10000g下離心20min。

3.如權(quán)利要求1所述一種高效降血壓水產(chǎn)品活性肽的制備方法，其特征在于，所述步驟5中，按步驟2得到的ACE抑制肽YLRLHF：納米級材料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)最佳為1:2-2:1。