[發明專利]一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法

在審

• 申請號: 202211136196.8
• 申請日: 2022-09-19
• 公開（公告）號: CN115200968A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 陳建義;馮杰;劉瑛;歐蕾;鮑爽;李智;謝紫欣;梁琦婷;吳佳佳;廖俊權;吳申浩
• 申請（專利權）人: 深圳市環境科學研究院
• 主分類號: G01N1/34
• 分類號: G01N1/34;G01N1/40;C07D471/16;C07K7/56;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/16;C07K1/36
• 代理公司: 深圳市智科友專利商標事務所 44241
• 代理人: 李苗苗

1.一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法包括以下步驟：

步驟A、藻華水體的預處理：將藻華水體通過超聲處理后過濾，濾液中加入甲醇溶液，得到甲醇濃度為1%體積含量的藍藻毒素提取液；

步驟B、藍藻毒素的富集濃縮：將步驟A中得到的藍藻毒素提取液通過固相萃取柱進行富集濃縮，所述的固相萃取柱選擇為：HLB plus小柱聯合PGC柱，藍藻毒素提取液先經過HLBplus小柱，再經過PGC柱；

步驟C、藍藻毒素的洗脫：將步驟B中含有富集濃縮的藍藻毒素的固相萃取柱用氮氣吹干，之后用洗脫液進行洗脫，得到含有藍藻毒素的洗脫液；洗脫前，調整固相萃取柱的順序，使洗脫液先經過PGC柱，再經過HLB Plus小柱；

步驟D、將步驟C得到的含有藍藻毒素的洗脫液用氮氣吹干后，得到藍藻毒素干粉。

2.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟A中，超聲處理藻華水體時，超聲頻率為40 KHz，超聲處理時間為30~60min；過濾采用的是0.45μm的再生纖維素濾膜；甲醇溶液選擇色譜級純度。

3.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟B中的固相萃取柱在藍藻毒素的富集濃縮前，通過以下步驟活化固相萃取柱：PGC柱先用二氯甲烷活化，HLB Plus小柱先用甲醇活化；在HLB Plus小柱下連接PGC柱后，再將PGC柱和HLB Plus小柱用去離子水活化。

4.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟B中，PGC柱的規格為200mg/3mL，HLB Plus小柱的規格為粒徑80A，孔徑60μm。

5.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟B中，藍藻毒素提取液通過固相萃取柱時，設置藍藻毒素提取液的流速為6mL/min。

6.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟C中，用氮氣吹干含有富集濃縮的藍藻毒素的固相萃取柱時，設置氮氣的流速為10~20mL/min。

7.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟C中的洗脫液為：二氯甲烷、甲醇和甲酸的混合溶液；洗脫液中，二氯甲烷和甲醇的體積比為35:65，加入甲酸，使甲酸體積含量為0.5%。

8.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟C中，洗脫液通過固相萃取柱時，設置洗脫液的流速為6mL/min。

9.根據權利要求1所述的一種從藻華水體中提純多種藍藻毒素的方法，其特征在于，所述的步驟D中，得到的藍藻毒素包括：CYN、NOD-R、MC-RR、MC-LR、MC-WR、MC-LY、MC-LW、MC-LF、MC-HtyR、MC-HiLR、MC-YR、MC-LA和Anatoxin-a。