[發明專利]一種免疫組化多重順次染色用串色阻斷劑及其應用

在審

• 申請號: 202211124214.0
• 申請日: 2022-09-15
• 公開（公告）號: CN115420580A
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發明（設計）人: 陳鵬;趙琳琳;牛銀銀;李三華;邢雅南;張林姿;齊華
• 申請（專利權）人: 河南賽諾特生物技術有限公司
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30;G01N33/531
• 代理公司: 鄭州睿信知識產權代理有限公司 41119
• 代理人: 郭佳效

本發明涉及一種免疫組化多重順次染色用串色阻斷劑及其應用，屬于生物醫學技術領域。本發明的串色阻斷劑主要由緩沖劑、氧化劑、洗脫劑組成。采用本發明串色阻斷劑進行免疫組化多重順次染色，可有效的防止交叉染色，且該串色阻斷劑適用于全自動免疫組化機，條件溫和，不會對組織帶來損傷，可廣泛應用于免疫組化病理檢驗的全自動多重順次染色中。

技術領域

本發明涉及一種免疫組化多重順次染色用串色阻斷劑及其應用，屬于生物醫學技術領域。

背景技術

免疫組化病理利用了抗原抗體特異性結合的原理，通過鼠抗人(可根據實際進行選擇)相應一抗與組織目標抗原進行特異性結合后；使用一抗后放大劑(兔抗鼠抗體)與一抗結合，起到放大作用；再使用HRP或AP標記的羊抗兔二抗，與一抗后放大劑結合，最后用相應的顯色劑進行顯色。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。

目前，常規的單染免疫組化的缺點是：①單個樣本的染色切片數量多，需要判讀多張切片的染色結果，綜合分析，得到病理診斷結果；②IHC對取材樣本的大小要求高，而隨著技術的迭代發展，患者的腫瘤組織樣本變成小活檢或細針穿刺術，得到的石蠟塊只有有限的腫瘤含量。從這些有限的部分中，病理學實驗室必須制作對主要亞型進行診斷所必需的HE玻片(通常是兩個)以及支持該診斷的其他玻片，所以存在很大的弊端。

針對這種現象，多重順次染技術問世，其原理是將HRP和AP兩種體系依次進行免疫組化的一個流程，該技術的改進在于：①在同一張組織切片上可以呈現兩種顏色，標記至少2種抗原靶標；②對于所需的一抗的種屬沒有限制；③減少組織使用量和醫生閱片的工作量。但是，該技術仍然存在一個致命的問題，在同一張切片上檢測多個抗原靶標時，前一個抗體染色會受到下一抗體染色過程的影響，導致第一個抗體的染色出現串色現象，非常容易是結果判讀錯誤。

在多重順次染色中造成串色的原因有：①第1染色程序中一抗與第2染色程序中一抗后放大劑出現結合造成交叉染色；②第1染色程序中一抗后放大劑與第2染色程序中一抗出現結合造成交叉染色；③第1染色程序中標記二抗與第2染色程序中一抗后放大劑出現結合造成交叉染色。目前通過單純的常規方法不能有效解決串色問題，例如血清、鼠IgG、兔IgG封閉處理等。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的第一個目的是提供一種免疫組化多重順次染色用串色阻斷劑，該串色阻斷劑可有效的防止交叉染色，條件溫和，不會對組織帶來損傷。

本發明的第二個目的是提供該串色阻斷劑在免疫組化多重順次染色中的應用。

為了實現上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種免疫組化多重順次染色用串色阻斷劑，主要包括氧化劑、洗脫劑和緩沖劑；所述的氧化劑為過氧化氫、過碳酸鈉、過氧化鎳中的一種或幾種；所述的洗脫劑為十二烷基硫酸鈉(SDS)、脫氧膽酸銨、膽酸鈉、肌氨酸、Triton-X100、CHAPS、尿素、十二烷基麥芽糖苷、Tween-20、Tween-80、洋地黃皂苷中的一種或幾種；所述的氧化劑與洗脫劑的質量比為0.1～5：0.1～5。

進一步優選地，所述的氧化劑與洗脫劑的質量比為0.3～4：0.5～3。

本發明提供的串色阻斷劑可有效防止免疫組化中多重順次染色-再染色過程中不同顏色之間的交叉串色問題，獲得準確的染色結果，有效提升工作效率和免疫組化病理診斷準確率。該串色阻斷劑中氧化劑使第1染色程序中殘留具有結合能力的一抗、一抗后放大劑和標記二抗失活，再通過洗脫劑將未結合的一抗、一抗后和標記二抗充分洗脫干凈，從而防止串色。

優選地，所述的緩沖劑pH為6.5～10.0。