[發明專利]一種線蟲試劑盒及其使用方法

在審

• 申請號: 202211111649.1
• 申請日: 2022-09-13
• 公開（公告）號: CN115669613A
• 公開（公告）日: 2023-02-03
• 發明（設計）人: 張鈴玉;黃逸瀅;李健;吳達仁
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;G01N21/84
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲;尤懷成

本發明涉及一種線蟲試劑盒及其使用方法，該試劑盒包括：96孔板、試劑A和試劑B；96孔板中的每個孔含有LB?膽固醇培養基和秀麗隱桿線蟲幼蟲；秀麗隱桿線蟲幼蟲為經同步化后饑餓狀態的dauer期線蟲；試劑A為大腸桿菌OP50；試劑B為5?氟脲嘧啶。該試劑盒可長時間存儲和即開即用，使研究者擺脫線蟲購買、培養等繁瑣過程，可工業化生產，適合在篩選抗衰老藥物的領域大規模推廣。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種線蟲試劑盒及其使用方法。

背景技術

隨著人民生活質量的提高以及科技的發展，人們對壽命有著更大的期許。因此，從動植物中尋找天然活性成分延緩衰老成為當前的研究熱點。構建衰老動物模型，使實驗動物呈現與人類相似的衰老表型，是研究人類衰老機制和研發抗衰老活性成分的重要手段。

目前廣泛應用的衰老動物模型，涵蓋無脊椎動物、魚類、嚙齒動物和非人靈長類等。其中，秀麗隱桿線蟲作為研究衰老的關鍵模式生物，有著得天獨厚的優勢：一、培養時間短、繁殖迅速，平均生命周期為2-3周，為實驗研究節約大量時間；二、作為一種真核生物，與高等的生物體有一些相同或相似的細胞和分子結構以及細胞信號控制通路，且基因測序已全部完成，基因組完整，從中所獲得的生物學信息或可推廣應用至更加復雜的生物體(包括人類)；三、線蟲結構簡單，通體透明，觀察方便，譬如采用普通的光學顯微鏡即可完成對其頭部擺動、身體彎曲頻率等運動行為。因此，隨著對秀麗隱桿線蟲衰老機制研究的不斷深入，越來越多的研究者利用線蟲作為模式生物進行抗衰老化合物的篩選和氧化應激性研究。

相關技術中的線蟲試劑盒仍需使用者進行挑蟲等步驟，工作量大、操作費時；且其試劑盒所提供的線蟲材料必須立即使用，保質期極其短暫，無法進行工業化生產和運輸。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。

為此，根據本發明的實施例，本發明在一方面提出了一種線蟲試劑盒，其包括：96孔板、試劑A和試劑B；

所述96孔板中的每個孔含有LB-膽固醇培養基和秀麗隱桿線蟲幼蟲；所述秀麗隱桿線蟲幼蟲為經同步化后饑餓狀態的dauer期線蟲；

所述試劑A為大腸桿菌OP50；

所述試劑B為5-氟脲嘧啶。

根據本發明實施例的一種線蟲試劑盒，利用秀麗隱桿線蟲在環境不佳(處于族群擁擠或食物不足)時，將進入另一種幼蟲期，即dauer期，dauer時期的線蟲處于一個較為恒定的狀態，維持時間超過3個月，且這一時期的持續時間并不會影響發育后的蟲體壽命，當提供食物后一個小時內，dauer幼蟲即可擺脫饑餓期，二到三個小時后恢復進食，并在十個小時后進入L4幼蟲期，經最后一次蛻皮進入成蟲期；秀麗隱桿線蟲的dauer期可為試劑盒的長時間存儲和即開即用提供前提條件，使研究者擺脫線蟲購買、培養等繁瑣過程，實現時間、金錢的雙重減負，可工業化生產，適合在篩選抗衰老藥物的領域大規模推廣。

另外，根據本發明上述實施例提出的一種線蟲試劑盒，還可以具有如下附加的技術特征：

可選地，經同步化后饑餓狀態的dauer期線蟲的制備包括以下步驟：

使用M9緩沖溶液將正處于產卵期的雌雄同體的秀麗隱桿線蟲從NGM培養基平板上多次沖洗下至50mL離心管中，靜止數分鐘，待線蟲下沉至管底，棄去上清；

將線蟲液定容至30mL于50mL離心管內，按照線蟲液和裂解液2：1的比例，向管中加入裂解液15mL，上下顛倒混合，反應5min后，9000rpm離心3min，棄去上清，收集沉淀；

沉淀使用M9緩沖液進行上下混勻，以9000rpm離心3min，重復3次，獲得含有蟲卵的溶液；