[發明專利]一株生產類母乳脂肪的釀酒酵母菌株及其構建方法與應用

在審

• 申請號: 202211084252.8
• 申請日: 2022-09-06
• 公開（公告）號: CN116162558A
• 公開（公告）日: 2023-05-26
• 發明（設計）人: 劉龍;陳堅;呂雪芹;吳文揚;堵國成;李江華;周國霖;劉延峰;張晨陽
• 申請（專利權）人: 江南大學;內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N15/53;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/55;C12P7/6409;C12R1/865
• 代理公司: 蘇州市中南偉業知識產權代理事務所(普通合伙) 32257
• 代理人: 楊慧林

1.一株類母乳脂肪組成的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述釀酒酵母工程菌以釀酒酵母為宿主菌，通過敲除自身天然的脂肪酸去飽和酶和將異源脂肪酸去飽和酶整合表達至所述宿主菌，同時強化脂肪酸合成前體乙酰輔酶A合成途徑，得到所述釀酒酵母工程菌。

2.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述宿主菌選自S.cerevisiaeCEN?PK2-1C?MATa；ura3-52；trp1-289；leu2-3,112；his3-Δ1；MAL2-8C；SUC2；S.cerevisiae?W303?MATa；ura3-1；trp1-Δ1；leu2-3,112；his3-11；ade2-1；can1-100；S.cerevisiae?FY1679?MATa；ura3-52；trp1-Δ63；leu2-Δ1；his3-Δ200；GAL2和S.cerevisiae?BY4743?MATa；ura3-Δ0；met15-Δ0；leu2-Δ0；his3-Δ1；lys-Δ0。

3.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述異源脂肪酸去飽和酶的合成通路關鍵酶包括銹菌屬去飽和酶OLE1，隱桿線蟲屬來源去飽和酶fat-2基因、fat-5基因、fat-6基因和fat-7基因，以及耶氏酵母屬去飽和酶FAD2基因。

4.根據權利要求3所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述銹菌屬去飽和酶OLE1的ENTREZ?GENE?ID為10534674；所述隱桿線蟲屬來源去飽和酶fat-2基因的ENTREZ?GENE?ID為178293、fat-5基因的ENTREZ?GENE?ID為180162、所述fat-6基因的ENTREZ?GENE?ID為178122和fat-7基因的ENTREZ?GENE?ID為179100以及耶氏酵母屬去飽和酶FAD2的ENTREZGENE?ID為2906773。

5.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述強化脂肪酸合成前體乙酰輔酶A合成途徑為：增加ADH2、ACS1、ALD6基因的拷貝數，同時敲除ADH1、ACH1、MLS1基因。

6.根據權利要求1所述的釀酒酵母工程菌，其特征在于，所述油酸合成途徑：擴增ELO1基因表達框插入208a位點增加脂肪酸延長酶ELO1基因的拷貝數。

7.權利要求1所述的釀酒酵母工程菌在發酵生產類母乳脂肪中的應用。

8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述發酵生產類母乳脂肪的步驟：將所述釀酒酵母工程菌接種至發酵培養基中，在pH為6.0-8.0條件下發酵，得到所述類母乳脂肪。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述發酵培養基為碳源無氨基氮源無菌培養基、限制氮源的YPD無菌培養基、無機鹽無菌培養基或限制氮源的大豆蛋白胨無菌培養基。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述釀酒酵母工程菌的接種率為2％～5％。